Desarrollo, producción y caracterización parcial de un fragmento variable de Ig de cadena sencilla fusionado al Fc de la IgG1 humana (scFv-Fc) con especificidad anti-HER2

• Ricardo Gámez-Hoyos Universidad del Zulia-Venezuela
• Anny Antonietta Pérez Sandoval Universidad del Zulia-Venezuela
• Verónica Porras Universidad del Zulia-Venezuela
• Ramón F. Montaño Universidad del Zulia-Venezuela
• Jaheli Fuenmayor Universidad del Zulia-Venezuela

Palabras clave: anticuerpos, biotecnología, proteínas recombinantes.

Resumen

Resumen. Debido a su versatilidad y facilidad de producción, los fragmentos variables de cadena sencilla (scFvs) derivados de anticuerpos constituyen una herramienta atractiva para una diversidad de aplicaciones. Entre ellas se encuentran la producción de insumos para inmunodetección, la inmunoterapia, el diagnóstico por imagenología, entre otras. En el presente trabajo desarrollamos una línea celular capaz de producir una proteína de fusión en la que se combinan un scFv humano dirigido contra el antígeno tumoral HER2 y la porción Fc de la IgG1 humana (scFv-Fc anti-HER2). Para su producción se emplearon células CHO, las cuales fueron transfectadas usando la técnica de lipofección, con un plásmido derivado del vector comercial pSecTag A que ha sido modificado con la secuencia de ADN anti-HER2 de interés. Los transfectomas resultantes produjeron la proteína scFv-Fc anti-HER2, la cual se encontró en el sobrenadante de cultivo en la forma de un homodímero. Mediante ensayos de citometría de flujo se demostró la capacidad de la proteína scFv-Fc antiHER2 de enlazarse de manera específica a la molécula HER2 expresada en la superficie de células de cáncer de mama, así como también a los receptores humanos para Fcγ expresados en la línea celular THP-1. Esta nueva línea celular servirá de base para la producción y purificación de la proteína de fusión scFvFc anti-HER2, cuya utilidad será ensayada en modelos de inmunodiagnóstico y/o inmunoterapia.