Purificación y caracterización de una hemoglobinasa del citosol del músculo de Ascaris suum

• Maritza De lo Ríos Universidad Simón Bolívar-Venezuela
• Zadila Mata Universidad Simón Bolívar-Venezuela

Abstract

Una enzima que preferencialmente cataliza la hidrólisis de la hemoglobina de pared corporal de Ascaris ha sido purificada del citosol del músculo del nematodo. La hemoglobinasa de Ascaris fue dos veces más activa con la hemoglobina de pared corporal que con la hemoglobina bovina, y degrada en SDS-PAGE la banda de la hemoproteína de Ascaris (Mr 17.000). El procedimiento de purificación de la hemoglobinasa consistió en aislamiento de la fracción citosólica de Ascaris, cromatografía de intercambio iónico en DEAE-Celulosa, y cromatografía de afinidad en Matrex-blue. La proteasa fue purificada 54 veces y mostró una actividad específica de 36,6 unidades por miligramo. El peso molecular de la proteína nativa (Mr = 86.000 mediante cromatografía de filtración en gel), y el tamaño de la subunidad (Mr = 43.000 por SDS-PAGE), indican que la proteasa es un dímero. Su actividad enzimática sobre hemoglobina bovina a pH 7,5 fue inhibida por E-64 un 73%, y estimulada por cisteína 60 veces, indicando que es una cisteín proteasa. Los resultados de este estudio sugieren que esta proteasa, actúa regulando los niveles intracelulares de la hemoglobina de pared corporal de Ascaris, y que la hemoglobina puede servir como fuente de aminoácidos y de grupos hemo para la nutrición y sobrevivencia del parásito.