Molecular diagnosis of Canine Parvovirus in geriatric dogs

• Jonathan Eduardo Muncha-Mullo Universidad Católica de Cuenca, Posgrado. Cuenca, Azuay, Ecuador
• Manuel Maldonado-Cornejo Universidad Católica de Cuenca. Cuenca, Azuay, Ecuador

DOI: https://doi.org/10.52973/rcfcv-e32133

Keywords: Parvovirus, geriatrics, PCR, gastroenteritis

Abstract

The objective of this study was to determine the presence of Canine Parvovirus in geriatric dogs that attended consultation with gastrointestinal symptoms compatible with canine parvovirus in the period from November to December 2021 in a Veterinary Clinic in the South of Quito, Ecuador by molecular diagnosis (PCR), stool samples were taken from the anus with a swab and homogenized (10 % w/v) in RNA Latter solution. Suspended faeces were separated by centrifugation and 200 µL aliquots of supernatants were used to extract DNA. For the design of primers and probes from GenBank, VP2 nucleotide sequences were retrieved from some CPV-2 strains, which were aligned using Primer3 software. The numbers and strains used for the alignment were: CPV2: CPV-b, M38245 and CPV-Northern, M19296; CPV2a: CPV-15, M24003 and CPV-31, M24000; CPV-2b: CPV-39, M74849 and CPV-133, M74852; Mutant CPV-2 Glu426: 56/00, AY380577. Identification of the target region of the assay was first performed by visual sequence alignment to amplify a conserved 93 bp fragment within the aligned VP2 sequences. Real-time PCR was performed with a real-time detection system and these data were analyzed with MXpro Real time qPCR software detector software (version 3.0). The 25 µL PCR mix for the reaction contains the Q Script master mix, the primers (VetNAAT lab), Eva green and nuclease-free water until the reaction is complete. The virus was detected in 28 % of geriatric patients sampled.

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