Técnicas de fertilización in-vitro de oocitos de ovinos
Abstract
Oocitos recolectados directamente de ovarios de ovejas sacrificadas o por aspiración de folículos a través de endoscopia de animales vivos son madurados in-vitro (MIV) en medio de cultivo celular TCM-199 suplementado con 10% de suero fetal bovino (SFB) y la adición de gonadotropinas (LH 5 µg/ml, FSH 2,5 µg/ml), y estradiol (1µg/ml), bajo atmósfera aire-5% C02, alta humedad y temperatura de 39% durante 24 h. Después de la remoción del cúmulo celular los oocitos madurados son inseminados con espermatozoides capacitados in-vitro provenientes de semen fresco o congelado en pellets, seguido de un período de incubación para la fertilización in-vitro (FIV) de 15 a 18 h bajo condiciones similares a la MIV. Los cigotes obtenidos son cultivados in-vitro (CIV) para su desarrollo utilizando medio TCM-199 suplementado con 10% de SFP y células epiteliales de oviducto. Igualmente, un medio sintético de oviducto modificado (SOFM) y suplementado con 20% de suero humano (SH) inactivado es también utilizado para la CIV. Recientes investigaciones reportan valores promedios de 85% 55% y 25% de tasa de MIV, FIV y CIV respectivamente de oocitos de ovejas y que finalmente logran desarrollarse hasta la fase de blastocisto. Más recientemente una alta tasa de 81% de embriones de una célula lograron desarrollarse hasta la fase de blastocisto bajo condiciones in-vitro empleando el medio SOF-SH.
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