Artículo Original
Parasitología
Kasmera 51:e5140589,
2023
P-ISSN 0075-5222 E-ISSN 2477-9628
https://doi.org/10.56903/kasmera.5140589
Detección de Microsporidios y factores
asociados en pacientes VIH positivos con síndrome diarreico en el Hospital “Dr.
José Daniel Rodríguez”, Guayaquil-Ecuador, 2021-2022
Detection of
Microsporidia and associated factors in HIV-positive patients with diarrheal
syndrome at the Hospital "Dr. José Daniel Rodríguez,” Guayaquil-Ecuador,
2021-2022
Pazmiño-Gómez Betty Judith (Autora de correspondencia). https://orcid.org/0000-0002-2611-2428.
Universidad Estatal de Milagro. Facultad de Salud y Servicios Sociales.
Milagro. Guayas-Ecuador. Dirección Postal: Cdla.
Universitaria Km. 1,5 vía Milagro Km. 26. Teléfono: +593-0994915587 E-mail: bpazminog@unemi.edu.ec
Rodas-Pazmiño
Karen Alexandra. https://orcid.org/0000-0002-6461-1068.
Universidad Estatal de Milagro. Facultad Biotecnología. Milagro.
Guayas-Ecuador. E-mail: krodasp@unemi.edu.ec
Cagua-Montaño
Luis Eduardo. https://orcid.org/0000-0002-5084-1460.
Universidad Estatal de Milagro. Facultad Biotecnología. Milagro.
Guayas-Ecuador. E-mail: lcaguam@unemi.edu.ec
Coello
Peralta Roberto Darwin. https://orcid.org/0000-0001-5152-2843.
Universidad de Guayaquil. Facultad de Veterinaria y Zootecnia. Guayaquil.
Guayas-Ecuador. E-mail: roberto.coellope@ug.edu.ec
Rodas-Pazmiño
Jennifer Paola. https://orcid.org/0000-0003-4046-3344.
Laboratorio Clínico y Microbiológico “Pazmiño”. Departamento de Microbiología.
Milagro. Guayas-Ecuador. E-mail: jennifer_rodas93@hotmail.com
Resumen
La Microsporidiosis es una infección humana oportunista emergente, capaz
de producir desde una infección
localizada hasta una infección sistémica, el objetivo fue detectar la presencia de Microsporidios en muestras de
heces de pacientes VIH positivos con síndrome diarreico en el Hospital “Dr. José Daniel Rodríguez” de Guayaquil,
2021-2022. Se estudiaron 87 pacientes mediante el método de microscopía óptica,
con tinción Gram Chromotropo rápido-caliente, el
análisis de resultados se efectuó a través de estadística descriptiva, además
se utilizó Excel y SPSS. Del total de
individuos estudiados se encontraron 13 (14,9%) pacientes positivos para
Microsporidios y 74 (85,1%) no presentaron esporas. Con relación al nivel
de educación 8 (61,5%) tienen primaria y 5 secundaria (38,5%), estado civil
10(76.9%) solteros y 3(23,1%) casados, la mayor concentración está en Guayaquil
8(6,5%), Durán 1(7,7%), Esmeralda 1(7,7%) y de Riobamba 3(23,1%). Los niveles
de LTCD4+, 7(53,85%) pacientes presentaron por debajo de 500 células xml3
y 6 (46,15%) superior a 500 células xml3, en cuanto a la carga viral
13 (100%) son detectables y con respecto al tipo de diarrea 13(100%)
presentaron diarrea crónica. En conclusión, el método de microscopía óptica
utilizando tinción Gram Chromotropo rápido-caliente
permitió detectar esporas de microsporidios demostrando alta sensibilidad y
especificidad.
Palabras claves: VIH, microscopía, microsporidios,
diarrea.
Abstract
Microsporidiosis is an emerging opportunistic human infection, capable of producing from a
localized infection to a systemic infection. The objective was to detect the
presence of Microsporidia in samples from HIV positive patients with diarrheal
syndrome at the “Dr. José Daniel Rodríguez” from Guayaquil, 2021-2022. 87
patients were studied using the optical microscopy method, with fast-hot Gram
Chromotrope staining, the analysis of results was carried out through
descriptive statistics and Excel and SPSS software were used. About the total
number of individuals studied, 13 (14.9%) patients were found positive for
Microsporidia and 74 (85.1%) did not present spores. Regarding the level of
education, 8 (61.5%) have primary school and 5 have secondary school (38.5%),
marital status 10 (76.9%) are single and 3 (23.1%) are married, the highest concentration
is in Guayaquil 8 (6.5%), Durán 1 (7.7%), Esmeralda 1 (7.7%) and Riobamba 3
(23.1%). The levels of LTCD4+, 7 (53.85%) patients had below 500 xml3 cells and
6 (46.15%) had more than 500 To the type of diarrhea, 13 (100%) presented
chronic diarrhea. In conclusion, the optical microscopy method using fast-hot
Gram Chromotrope staining allowed the detection of microsporidia spores,
demonstrating high sensitivity and specificity.
Keywords: HIV, microscopy, microsporidia, diarrhea.
Recibido: 15/06/2023 | Aceptado: 20/07/2023 |
Publicado: 03/10/2023
Como Citar: Pazmiño-Gómez BJ,
Rodas-Pazmiño KA, Cagua-Montaño LE, Coello Peralta RD, Rodas-Pazmiño JP. Detección
de Microsporidios y factores asociados en pacientes VIH positivos con síndrome
diarreico en el Hospital “Dr. José Daniel Rodríguez”, Guayaquil-Ecuador,
2021-2022. Kasmera. 2023;51:e5140589. doi: 10.56903/kasmera.5140589
Introducción
Los pacientes con VIH/SIDA
son blanco fácil para presentar infecciones oportunistas con pérdida en el
número y la función de los linfocitos CD4+, este puede infectar y alterar
macrófagos, células dendríticas, Langerhans y linfocitos CD8+, haciéndolos más
susceptibles a infecciones oportunistas ocasionadas por Microsporidios (1).
Los Microsporidios son
microorganismos oportunistas emergentes que afectan a los pacientes
inmunodeprimidos causando síndrome diarreico al inicio fueron identificados
como protozoos, pero en la actualidad por estudios genéticos moleculares se
encuentran clasificados como hongos, son eucariotas, parásitos intracelulares
obligados sin mitocondrias que atacan a vertebrados e invertebrados, se
identificó por primera vez en gusanos de seda por Naegely
en 1.857 (2-4).
Hasta el momento se han descrito más de 143 géneros y
1.200 especies de Microsporidios, que infectan a animales vertebrados e
invertebrados de las cuales hay al menos 15 especies que afectan a humanos (5).
Este hongo infecta y se
desarrolla dentro de los macrófagos intestinales, propagándose la infección
desde el intestino a otros órganos, posiblemente responsable de infecciones
oculares y hepáticas (6,7). La vía de trasmisión es fecal-oral,
oral-oral, inhalación de aerosoles, agua y alimentos contaminados, contacto
directo con piel u ojos lesionados y transmisión sexual (8).
Se han notificado casos de
Microsporidios a nivel mundial en pacientes VIH positivos con presencia de
diarrea en Europa y Estados Unidos fluctúan entre el 12% y 50%; Alemania 36%;
España 15%; Niger Bretagne
7%; México 31%; Brazil 27,5%; Colombia 3,5%; Venezuela
13,6%; Uruguay 54%; Ecuador 25%; Perú 3%; Zimbabwe
10%; Francia 39%; Italia 9,23%; Tailandia 25,3%; Guinea 11%; Portugal 42,8 %;
Nigeria 10,5%; Etiopía 18,2%; Malasia 13%; Rusia 18,9%;República Checa 42%;
India 15,9%; Congo 8,2% y Vietnam 9,5% (9-13).
El diagnóstico de
laboratorio para Microsporidios requiere entereza, porque las esporas son tan
pequeñas que resulta difícil su identificación. Existen diferentes métodos para
identificar Microsporidios como Tinción de Gram Chromotropo
rápido caliente, Tricrómica modificada de Weber y Tricrómico de Rayan de alta sensibilidad y especificidad,
el método de inmunofluorescencia, Microscopía de Barrido, Microscopía de
transmisión, actualmente la nueva de la investigación es la información
genética celular donde se identifica secuencias específicas de ADN o ARN con
técnicas de biología molecular. siendo la PCR una de las más usadas. los ensayos de PCR en
tiempo real una de las herramientas más utilizadas para el diagnóstico de microsporidiosis intestinal (14-17).
Para el diagnóstico de esporas de Microsporidia
generalmente se utiliza Gram Chromotropo
pero constantemente se realizan combinaciones de los métodos para mejorar su
visualización así tenemos que se ajusta la tinción de Gram y Weber, exceptuando
el paso de safranina, (18). Conforme avanza el
tiempo los investigadores siguen innovando y el Gram Chromotropo
fue adaptado cambiando el Chromotropo por un Cromotropo caliente facilitando el diagnóstico en menor
tiempo de incubación (19).
La presente
investigación tiene como propósito detectar la presencia de microsporidios y
sus factores asociados en pacientes VIH positivos con síndrome diarreico del
Hospital de Infectología “Dr. José Daniel Rodríguez” de la ciudad de Guayaquil Provincia del Guayas.
Métodos
Tipo y diseño de investigación:
la
presente investigación es un estudio de tipo descriptivo, prospectivo y
correlacional no experimental, de diseño transversal, el muestreo aplicado
fue censal con el total de Pacientes VIH/positivo con diarreas que fueron atendidos
en el Hospital de Infectología José Daniel Rodríguez de la Ciudad de Guayaquil
desde abril 2021 a marzo 2022, se generó
un formato para la recolección de datos, tomando de la historia clínica de cada
uno de los participantes las características, socio demográficas, clínica y de
laboratorio (LTCD4+/mm3 y carga viral).
Población y muestra de estudio:
la población en estudio estuvo
conformada por los pacientes VIH positivos ingresados en el Hospital de
Infectología de abril 2021 a marzo 2022. Se seleccionaron los pacientes que
presentaron síndrome diarreico que cumplieron con el criterio de inclusión el total de la muestra fue 87 (n=87).
Criterios
de Inclusión y Exclusión
· Pacientes VIH
positivo, mayores de 18 años con presencia de diarrea ingresados en el área de
emergencia y hospitalización del Hospital de Infectología Dr. José Daniel
Rodríguez.
·
Tener Historia Clínica en la Institución.
·
Tener Recuento Linfocitos TCD4/mm3 y carga viral reciente.
·
Paciente de Nacionalidad Ecuatoriana y Extranjeros con más
de 10 años de residencia.
· Paciente que
presenten otro tipo de Inmunodeficiencia
·
Paciente que estén recibiendo tratamiento para
Microsporidios
Recolección de la información: para
realizar la investigación se contó con la autorización de los directivos del
Hospital de Infectología Dr. José Daniel Rodríguez y los datos se obtuvieron a
través de la revisión de las historias clínicas del departamento de
estadística.
Recolección de la muestra: se recolectaron
muestras diarreicas codificadas a las mismas que se les realizo un extendido en
una placa porta objeto y colorearlas con tinción Gram chromotropo
rápido caliente para su posterior observación microscópica e identificación de
esporas de microsporidios.
Análisis estadístico: para esta investigación se realizó recolección y análisis
de datos, que fueron tabulados y seleccionados. Se aplicó un software como
Microsoft Excel, SPSS y STATA, especializados en estadística descriptiva e
inferencial respectivamente.
Aspectos éticos: se obtuvo la aprobación de estudios
observacionales de muestras biológicas en seres humanos con el aval del Comité
de Ética del Hospital Luis Vernaza de Guayaquil. En consideración con los
principios éticos del estudio, la documentación será confidencial y solo tendrá
acceso el investigador principal con fines académicos, además no implica riesgo
alguno para los pacientes participantes, los mismos que fueron informados y
decidieron de manera voluntaria a participar del este estudio y sus identidades
no serán divulgadas.
Resultados
Utilizando la tinción Gram chromotropo se puede observar en la Figura 1, que 13 (14,9%) de los pacientes VIH positivo con síndrome diarreico, son positivos para Microsporidios y 74 (85,1%) no presentaron esporas.
En la Figura 2 se observa una muestra positiva para microsporidios intestinales, la flecha señala la ubicación de la espora que se tiñe de color violeta pálido, además se evidencia la vacuola posterior y el túbulo polar con objetivo 100X.
Figura 2. Tinción de Gram Chromotropo
rápido caliente (Microsporidios) Foto original del autor
Se identificaron 13 pacientes con microsporidios y el intervalo de mayor concentración en relación con la edad está entre 36 y 43 años (53,8%), uno de 31 años (7,7%) y 5 (38,5%) mayor de 43 años (Figura 3).
Figura 3. Distribución de pacientes con Microsporidios de acuerdo con las edades
Los pacientes que presentaron microsporidios de acuerdo con el género 9 son varones (69,2%) 4 mujeres (30,8%). Se evidencia que el género masculino es más propenso a infectarse de este microrganismo (Figura 4).
Figura 4. Distribución de pacientes con Microsporidios de acuerdo con el género
Con relación al nivel de educación 8 pacientes tienen educación primaria (61,5%) y 5 educación secundaria (38,5%) lo que refleja que a menor nivel de educación mayor es el riesgo de contagio por microsporidios (Figura 5).
Figura 5. Distribución de pacientes con Microsporidio de acuerdo con el nivel de educación
El estado civil de los pacientes corresponde 10(76.9%) solteros y 3(23.1%) casados, se evidencia que los solteros son más susceptibles que los casados a infectarse por microsporidos; se infiere por mayor probabilidad de promiscuidad (Figura 6).
Figura 6. Distribución de pacientes con Microsporidio de acuerdo con el estado civil
En relación con la procedencia de los pacientes con microsporidios la mayor concentración está en Guayaquil 8(6,5%), Durán 1(7,7%), Esmeralda 1 (7,7%) pertenecientes a la Región Costa y de Riobamba 3(23,1%) pertenecientes a la Región Sierra (Figura 7).
Figura 7. Distribución de pacientes con Microsporidio de acuerdo
con la procedencia
Los
resultados del recuento de los niveles de linfocitos T CD4+ de los pacientes
VIH positivos con Microsporidios es como sigue, 7 (53,85%) presentan un
recuento hasta 500 células x ml3, y 6
(46,15%.) tienen un recuento mayor a 500 células x ml3. Siendo el
valor de referencia de 500 a 1.200 células x ml3 considerado normal,
evidenciándose que la mayoría tienen un bajo nivel de estas células. Se detecta
carga viral en las muestras de sangre de los pacientes 13 (100%) pacientes VIH
positivos con Microsporidios, significando que están en capacidad de trasmitir
el virus de VIH. Cuando es indetectable indica que ya no puede trasmitir el
virus. De acuerdo con la clínica de los pacientes VIH positivos con
Microsporidios 13 (100%), Presentan diarrea crónica. De acuerdo con el
tratamiento antirretroviral que reciben los pacientes VIH positivos con
Microsporidios se observa que son malos adherentes 8 (61,5%), abandonan el
tratamiento, 2 (15,4%) tienen adherencia continua y 3 (23,1%) son pacientes que
inician el tratamiento. Según estos datos la mayoría de los pacientes son malos
adherentes ya que abandonan su tratamiento, el menor porcentaje de los pacientes
siguen de forma continua con él y el resto de los pacientes inician el
tratamiento (Tabla 1).
Tabla 1. Características
clínicas de los pacientes VIH positivos con Microsporidios
Linfocito CD4+ |
Pacientes |
Porcentaje |
0-500 células x
ml3 |
7 |
53,85 |
501–1.200
células x ml3 |
6 |
46,15 |
Total |
13 |
100 |
Carga Viral |
Pacientes |
Porcentaje |
Detectable |
13 |
100 |
Total |
13 |
100 |
Tipo de diarrea |
Pacientes |
Porcentaje |
Crónica |
13 |
100 |
Total |
13 |
100 |
Adherencia TARV |
Pacientes |
Porcentaje |
Mal adherente |
8 |
61,50 |
Adherencia
continua |
2 |
15,40 |
Inicia |
3 |
23,10 |
Total |
13 |
100 |
Discusión
En Irán en el año 2013 se analizaron 175 muestras de
heces en el Laboratorio de Proto zoología de la Escuela de Salud Pública de la
Universidad de Ciencias Médicas de Teherán, se evaluaron mediante los métodos
de tinción con Chromotropo, blanco de Calcoflúor, Gram Chromotropo
rápido caliente, obteniendo una alta especificidad 17 de 18 (94,4 %) positivos
para esporas de Microsporidios (20).
Se estudiaron
120 pacientes en el Hospital en Delhi en India entre noviembre de 2014 y abril
de 2016 de los cuales 28 (23,33%) pacientes eran VIH seropositivos con diarrea
en los cuales se aplicó la tinción Gram Chromotropo
rápido caliente obteniéndose el 38,4% de sensibilidad y especificidad para la
detección de esporas de Microsporidios, la edad media fue de 30 años y los
pacientes con trastornos gastrointestinales fue de 29 a 36 años (21).
En una
investigación efectuada en Medellín Colombia se analizaron 159 pacientes VIH positivos que presentaron síntomas
gastrointestinales con una frecuencia del 50,3% y los casos con SIDA el 4,7%
tenían diarrea crónica, se evidencia que el síndrome diarreico es el síntoma gastrointestinal más frecuente en las
personas infectadas por el virus del VIH. Es primordial controlar la diarrea en
este grupo vulnerable debido al daño ocasionado en los enterocitos situados en
el aparato digestivo; por otra parte, la adherencia a la TARV ayuda a mejorar
el estado nutricional, estabilidad en el peso y la calidad de vida, en
pacientes que presentan bajos niveles de CD4+ < 100 células x ml3
(22).
En un estudio realizado en
Bogotá Colombia en el 2001, se analizaron 115 pacientes infectados con VIH
presentaron diarrea 66% se identificó el 29% de microsporidios con otras
tinciones y con Gram Cromotropo el 3,5% fueron
microsporidios (23).
En Saná capital de Yemen en
Asia en el 2020 estudiaron a 402 pacientes VIH/SIDA, asociados con diarrea,
determinándose una prevalencia de microsporidios del 14,2% (57/402), se
analizaron muestras de heces utilizando la tinción de Gram Cromotropo
para identificar esporas de microsporidios de color azul rosado con estructuras
parecidas a un cinturón de color azul, además se analizó muestras de sangre
para el contaje de células CD4+ con un resultado < 200 células xml3,
en relación al género el 77.9% (313/402 ) eran masculino y 22,1% ( 81/402)
femenino. Los niveles de CD4+ el 77,3% (306/402) ≥ 200 células y el 22,7%
(< 200 células; el rango de edades es 64,9% (261/402) < 40 años y 35,1%
(141/402) ≥ 40 años (24).
En el presente estudio se
analizaron 87 (100%) muestras de heces de pacientes VIH positivos en los cuales
se detectó esporas de Microsporidios en 13 (14,94%) pacientes con tinción Gram Chromotropo rápido caliente, es importante resaltar que se
utilizó otros métodos como inmunofluorescencia con anticuerpos monoclonales y
microscopia electrónica de trasmisión reproduciéndose los resultados
observándose esporas de microsporidios, en relación con la edad la mayor
concentración está entre 36 y 43 años (53,8%), uno de 31 años (7,7%) y 5
(38,5%) mayor de 43 años, por lo tanto se pueden comparar los resultados con
otros países como Irán, India, Yemen y Colombia, en el que se evidencia que los
pacientes VIH positivos con diarrea pueden afectarse a cualquier edad y en
relación a la coloración utilizada para
el diagnóstico de este microorganismo,
se deduce que esta coloración es útil para identificar de manera rápida
y sencilla esporas de microsporidios, pero tiene algunas limitaciones como la
experiencia del microscopista y que no se puede diferenciar entre especies.
Se llevó a cabo un estudio en
Nigeria en 375 pacientes VIH positivos entre enero 2009 y julio 2010 con el
objetivo de determinar la prevalencia de Microsporidium
fue de 42,4 % (159/375), los
pacientes VIH positivos que presentaron diarrea con presencia de microsporidos fue de 95,6% (152/ 159), en cuanto a los
pacientes con microsporidios con buena adherencia al tratamiento con TARV comparándolos con los pacientes que no tomaban TARV no tuvo
significancia estadística, es decir el riesgo de enfermar por este
microorganismo fue similar (25)
En la presente investigación
los pacientes que tienen VIH positivo con síndrome diarreico identificados con microsporidios 13 (100%) presentaron diarrea
crónica, se observa que 8 (61,5%) son mal adherentes, 2 (15,4%) abandonan el
tratamiento y 3 (23,1%) tienen adherencia continúa puesto que inician el
tratamiento. Relacionando el estudio de Colombia y Ecuador la situación es
congruente, los pacientes que abandonan los TARV tienden a ser más susceptibles
a infecciones por diferentes tipos de antígenos, a diferencia de Nigeria en el
cual manifiestan que el riesgo de infección por microsporidios es igual tomen o
no tomen la medicina, por lo tanto, lo ideal es iniciar con el TARV y se debe
concientizar a los pacientes de la necesidad de tomar el medicamento de manera
continua.
Es
indiscutible que el sistema inmunitario juega un papel preponderante en la
cuantificación de los niveles de CD4+ con mayor riesgo en pacientes
inmunodeprimidos, sin embargo, utilizando diferentes softwares estadísticos los
resultados obtenidos son concordantes en ambas investigaciones.
Conflicto de Relaciones y Actividades
Los
autores declaran que la investigación se realizó en ausencia de relaciones
comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un posible conflicto
de relaciones y actividades.
A la Universidad Estatal de Milagro
(UNEMI), al personal del Hospital Dr. José Daniel Rodríguez por su apoyo en los
procesos internos, al personal del Instituto Nacional de Investigación en Salud
Pública (INSPI), en especial al Dr. Luis Solorzano y Dra. Linda Diaz, al
talento humano del Laboratorio Clínico y Microbiológico Pazmiño y al equipo de
investigadores que participaron en la ejecución de este proyecto.
Financiamiento
Esta
investigación no recibió financiamiento de fondos públicos o privados, la misma
fue autofinanciada por los autores.
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Contribución de los Autores
PGBJ: conceptualización, metodología, software, validación,
análisis formal, investigación, recursos, curación de datos, redacción-preparación
del borrador original, redacción, revisión y edición, visualización, supervisión,
planificación y ejecución, Administración de Proyectos. RPKA: investigación, recursos, curación de datos, redacción-preparación del
borrador original, redacción, revisión y edición. CMLE: conceptualización, validación, análisis formal, investigación,
redacción-preparación del borrador original. CPRD: conceptualización,
análisis formal, curación de datos, redacción-preparación del borrador original.
RDJP: conceptualización, validación, análisis formal,
investigación, curación de datos, supervisión, planificación y ejecución.
©2023.
Los Autores. Kasmera. Publicación del Departamento de Enfermedades
Infecciosas y Tropicales de la Facultad de Medicina. Universidad del Zulia.
Maracaibo-Venezuela. Este es un artículo de acceso abierto
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reproducción sin restricciones en cualquier medio, siempre y cuando la obra
original sea debidamente citada.