Efecto de la suplementación con epinefrina en los medios de maduración sobre la competencia de desarrollo de los ovocitos de búfala
Resumen
La epinefrina es una catecolamina que desempeña un papel vital durante el estrés celular al eliminar los radicales li-bres. Durante la maduración in vitro, los ovocitos experimentan condiciones estresantes que probablemente comprometan su desarrollo. El objetivo del experimento fue investigar el efecto de la adición de epinefrina en medios de maduración in vitro (IVM) sobre la maduración nuclear y la competencia de desarrollo in vitro de los ovocitos. Los ovocitos de búfalas se recolectaron de ovarios de matadero. Se maduraron ovocitos de grado A y B durante 24 horas en medio IVM suplementado con concentraciones crecientes de epinefrina 0, 0,01, 1,0 y 100 μM. La maduración de los ovocitos se examinó en función de la maduración nuclear después de la tinción con Hoechst 33342 (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.). Después de madurar con epinefrina, los ovocitos fueron fertilizados durante 6 horas con semen postdescongelado de un solo toro. Se cultivaron presuntos cigotos en medios comerciales (IVF Bioscience, Falmouth, Reino Unido) y se observó la escisión 48 horas después de la fertilización. La tasa de blastocistos se evaluó el día 7 del cultivo. Los medios de maduración y fertilización se prepararon internamente. Se contó el número de blastómeras a partir del blastocisto eclosionado después de teñir con Hoechst 33342 utilizando un microscopio invertido equipado con el software Cellsens. Los datos se analizaron utilizando los procedimientos GLIMMIX de SAS. El modelo estadístico incluyó el efecto fijo del tratamiento y la replicación aleatoria. Se construyeron contrastes polinomiales ortogonales para evaluar la dosis-respuesta de epinefrina. Los resultados se representan como medias de mínimos cuadrados y el respectivo error estándar de medias (LSM ± SEM). La adición de epinefrina a los medios de maduración no afectó la maduración y escisión nuclear. Los medios suplementados con epinefrina a concentraciones de 0, 0,01, 1,0 y 100 μM tuvieron una proporción de ovocitos meióticos I y II de 83,1±6,0, 85,5±6,3, 75,3±5,9 y 70,9±6,4%) y una tasa de escisión de 58,2±4,6. , 60,5±4,6, 54,7±4,5 y 47,8±4,4%), respectivamente. Sin embargo, la proporción de blastocistos a partir de los ovocitos maduros aumentó (p=0,01; 35,9±4,5, 43,2±4,8, 36,0±4,3 y 25,8±3,8%) con la suplementación con epinefrina y la respuesta se maximizó (efecto cuadrático; p=0,01 ) a una concentración de 0,01 μM. Consistentemente, la proporción de blastocistos de los embriones escindidos tendió a aumentar (p=0,13; 62,1±5,0, 72,4±4,6, 66,7±4,7 y 55,3±5,3%) con epinefrina y la respuesta se maximizó (efecto cuadrático; p=0,04) a una concentración de 0,01 μM. La suplementación con epinefrina en los medios de maduración aumentó (p<0,01) el número de blastómeros y la respuesta se maximizó (efecto cuadrático; p<0,01) a una concentración de 1,0 μM. Se concluye que la suplementación con epinefrina en los medios de maduración tuvo un efecto favorable sobre la formación de blastocistos y se observaron beneficios significativos a una concentración de 0,01 μM.
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