Uso experimental de antígenos micobacterianos en la prueba cutánea de tuberculina en búfalos de agua
Resumen
En Italia, el control de la tuberculosis bovina (TB) en la población de búfalos de agua se lleva a cabo principalmente mediante la prueba cutánea de la tuberculina (PT). La prueba mide el aumento del grosor de la piel 72 horas (h) después de la inyección intradérmica de derivados proteicos purificados (PPD) de micobacterias. La PT puede implicar la prueba intradérmica única con PPD bovino (PPDB), o la prueba comparativa añadiendo una segunda inyección con tuberculina aviar (PPDA). El uso de un par de PPD reduce los falsos positivos causados por micobacterias no tuberculosas. Este estudio piloto tuvo como objetivo evaluar el uso potencial de PPDB, PPDA, junto con un objetivo antigénico secretorio temprano de 6 kDa (ESAT-6), una proteína filtrada de cultivo de 10 kDa (CFP-10) y proteínas secretoras tempranas (ESP) en la TST, en búfalos sanos y naturalmente infectados con tuberculosis. Se seleccionaron veintiún búfalos con resultados positivos para interferón gamma (IFN-γ) de un rebaño con brote de tuberculosis y 11 búfalos de un rebaño libre de tuberculosis. Todos los sujetos también fueron sometidos a la prueba de IFN-γ utilizando los mismos antígenos (Ag) que la TST para verificar la respuesta celular in vitro y excluir animales anaérgicos que no respondieron a la estimulación in vitro con el mitógeno. La PT se realizó según el programa nacional italiano de erradicación de la tuberculosis y el Reg. UE 2020/689. Se utilizaron ocho sitios de inyección intradérmica en cada hombro de animal (4 en el lado derecho y 4 en el lado izquierdo). Se inocularon tres concentraciones del cóctel proteico ESAT6-CFP10 (10, 20 y 30 μg) y dos de ESP (50 y 100 μg). PPDB y PPDA siempre se incluyeron en la TST, junto con PBS como control negativo. Las reacciones cutáneas se midieron con calibradores antes de la prueba y cada 24 h durante 4 días. La PT se consideró positiva en animales con un aumento del espesor de la piel entre las lecturas de la prueba post y predérmica de > 4 mm, dudoso si entre 2 y 4 mm, negativo < 2 mm. Los sujetos negativos también mostraron una respuesta cutánea al PPDB a las 24 y 48 h, pero se volvió completamente negativa a las 72 h, el tiempo de lectura prescrito. En los búfalos positivos, la cinética de las respuestas de la piel mostró que la respuesta más fuerte fue al PPDB a las 24 h, y algunos sujetos se volvieron dudosos a las 72 y 96 h. Se observó una respuesta máxima a las 48 horas con PPDA y con 20 μg del cóctel de proteínas ESAT6-CFP10, seguida de una disminución. La respuesta a ESP-100 μg se mantuvo alta a las 24 y 48 h y luego disminuyó, permaneciendo positiva a las 72 h. ESP mostró el mejor desempeño con mayor reactividad en animales positivos y ninguna reactividad en animales negativos a las 72 h. Por lo tanto, ESP podría ser un excelente candidato para estudios más extensos en la especie de búfalo para mejorar la sensibilidad y especificidad de la TST.
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