Reporte secuencia de una cepa de Babesia bigemina aislada en bovinos del municipio Girón, Azuay, Ecuador

• Jorge Gualberto Bustamante–Ordóñez Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Agropecuarias. Cuenca, Ecuador - Universidad del Zulia, Facultad de Ciencias Veterinarias. Maracaibo, Venezuela
• Diego Andrés Bustamante–Guzmán Universidad de Cuenca, Facultad de Ciencias Químicas. Cuenca, Ecuador
• Sergio Emiro Rivera-Pirela Universidad del Zulia, Facultad de Ciencias Veterinarias. Maracaibo, Venezuela

DOI: https://doi.org/10.52973/rcfcv-e34339

Palabras clave: Babesia bigemina, Babesia bovis, Rhipicephalus microplus, frotis de Giemsa, PCR–RFLP, qRT–PCR, secuenciación de Sanger

Resumen

En este estudio, los archivos ab1 obtenidos de la secuenciación Sanger (hacia adelante y hacia atrás) se utilizaron para realizar el ensamblaje y análisis de la secuencia. Para ello se utilizó el software Staden Package (versión 2.0b10), el cual consta de dos programas: Pregap4 y Gap4. Pregap4 fue responsable del análisis de calidad y la preparación de datos, mientras que Gap4 realizó el ensamblaje, la verificación, el análisis de pares de lectura, la edición contig y el cálculo de confianza de la secuencia de consenso. Se utilizó BLASTn para identificar posibles homólogos (Babesia bovis y B. bigemina). La secuenciación basada en secuencias del gen 18S de B. bigemina, utilizando los oligonucleótidos PIRO A For: (5'–TACCCAATCCTGACACACAGGG–3') y PIRO B (5'–TTAAATACACGAATGCCCCCCCAAC–3'), mostrando una banda de aproximadamente 393 pb, reveló la distribución nucleótica de una cepa designada como 4623Ba.bi_GIR–E, de B. bigemina. El producto produjo una secuencia de 369 pb (>H230420–007_C05_46_Oligo1.ab1) y 371 pb (>H230420–007_I07_46_Oligo2.ab1). B. bigemina fue aislada de sangre periférica de ganado mestizo infectado, positivo a prueba de Giemsa, PCR–RFLP y qRT–PCR, del municipio de Girón en la provincia del Azuay, Ecuador, ubicado a más de 2.000 metros sobre el nivel del mar, el cual comparte 99,72 % de homología con varias secuencias de B. bigemina reportadas en Ecuador, países latinoamericanos como Colombia, Brasil, revelando posibles orígenes del patógeno y, con las secuencias de B. bigemina publicadas aisladas en latitudes extracontinentales, corroborando así la estabilidad genómica del parásito.

Citas

Alvarez JA, Rojas C, Figueroa JV. Diagnostic tools for the identification of Babesia sp. in persistently infected cattle. Pathog. [Internet]. 2019; 8(3):143–157. doi: https://doi.org/m2hj

Enríquez S, Guerrero R, Arrivillaga–Henríquez J, Araujo P, Villacrés E, Enríquez A., Benítez–Ortíz W. New records of ticks of genus Amblyomma Koch, 1844 (Acari: Ixodidae) for Ecuador. Acta Parasitol. [Internet]. 2020; 65:430–440. doi: https://doi.org/m2hm

Retamales–Castelletto E, Manzo–Garay V. Recomendaciones para la tinción de frotis sanguíneos para la lectura del hemograma [Internet]. Santiago, Chile: Instituto de Salud Pública de Chile; 2018 [consultado 20 Ago. 2023]. 14 p. Disponible en: https://goo.su/W1CeUm

Abdela N, Ibrahim N, Begna F. Prevalence, risk factors and vectors identification of bovine anaplasmosis and babesiosis in and around Jimma town, Southwestern Ethiopia. Acta Trop. [Internet]. 2018; 177:9–18. doi: https://doi.org/m2hn

Carret C, Walas F, Carcy B. Grande N, Précigout É, Moubri K, Schetters TP, Gorenflot A. Babesia canis canis, Babesia canis vogeli, Babesia canis rossi: Differentiation of the Three Subspecies by a Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis on Amplified Small Subunit Ribosomal RNA Genes. J Eukaryot. Microbiol. [Internet]. 1999; 46(3):298–303. doi: https://doi.org/drjrcd

Soberanis–Bernal PJ, Castañeda–Arriola RO, Figueroa–Millán JV, Rojas–Martínez C, Lira–Amaya JJ, Álvarez–Martínez JA, Santamaría–Espinosa RM, Martínez–García G. Aplicación de una prueba de PCR–RFLP en el diagnóstico de la infección por Babesia spp. en bovinos. Estudio retrospectivo. En: Da Silva LF, De Oliveira VC, comps. Ciencias agrarias: Estudios sistemáticos e investigación avanzada 3 [Internet]. Ponta Grossa, Paraná, Brasil: Atena Editora; 2023. p. 70–89. doi: https://doi.org/m2xj

Allsopp MT, Visser ES, du Plessis JL, Vogel SW, Allsopp BA. Different organisms associated with heartwater as shown by analysis of 16S ribosomal RNA gene sequences. Vet. Parasitol. [Internet]. 1997; 71(4):283–300. doi: https://doi.org/dv9b5v

Allsopp MT, Allsopp BA. Molecular sequence evidence for the reclassification of some Babesia species. Ann. N. Y. Acad. Sci. [Internet]. 2006; 1081(1):509–517. doi: https://doi.org/ctkv9t

Criado–Fornelio A, Buling A, Casado N, Gimenez C, Ruas J, Wendt L, Rosa–Farias N, Pinheiro M, Rey–Valeiron C, Barba–Carretero JC. Molecular characterization of arthropod–borne hematozoans in wild mammals from Brazil, Venezuela and Spain. Acta Parasitol. [Internet]. 2009; 54(3):187–193. doi: https://doi.org/bxdssx

Durrani AZ, Kamal N. Identification of ticks and detection of blood protozoa in friesian cattle by polmerase chain reacton test and estimation of blood parameters in district Kasur, Pakistan. Trop. Anim. Health Prod. [Internet]. 2008; 40:441–447. doi: https://doi.org/bwxhft

Luo J, Yin H, Liu Z, Yang D, Guan G, Liu A, Ma M, Dang S, Lu B, Sun C, Bai Q, Lu W, Chen P. Molecular phylogenetic studies on an unnamed bovine Babesia sp. based on small subunit ribosomal RNA gene sequences. Vet. Parasitol. [Internet]. 2005; 133(1):1–6. doi: https://doi.org/b3wvfq

M’ghirbi Y, Bouattour A. Detection and molecular characterization of Babesia canis vogeli from naturally infected dogs and Rhipicephalus sanguineus ticks in Tunisia. Vet. Parasitol. [Internet]. 2008; 152(1–2):1–7. doi: https://doi.org/c3spzf

Salih DA, El Hussein AM, Seitzer U, Ahmed JS. Epidemiological studies on tick–borne diseases of cattle in Central Equatoria State, Southern Sudan. Parasitol. Res. [Internet]. 2007; 101:1035–1044. doi: https://doi.org/dmf2f4

Reddy GR, Chakrabarti D, Yowell CA, Dame JB. Sequence microheterogeneity of the three small subunit ribosomal RNA genes of Babesia bigemina: expression in erythrocyte culture. Nucleic Acids Res. [Internet]. 1991; 19(13):3641–3645. doi: https://doi.org/chd66v

Holland PM, Abramson RD Watson R, Gelfand DH. Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5'––––3'exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [Internet]. 1991; 88(16):7276–7280. doi: https://doi.org/cmpfrs

Brayton KA., Lau AOT, Herndon DR, Hannick L, Kappmeyer LS, Berens SJ, Bidwell SL, Brown WC, Crabtree J, Fadrosh D, Feldblum T, Forberger HA, Haas BJ, Howell JM, Khouri H, Koo H, Mann DJ, Norimine J, Paulsen IT, Radune D, Ren Q, Smith Jr. RK, Suarez CE, White O, Wortman JR, Knowles Jr. DP, McElwain TF, Nene VM. Genome sequence of Babesia bovis and comparative analysis of apicomplexan hemoprotozoa. PLoS pathog. [Internet]. 2007; 3(10):e148. doi: https://doi.org/fqkf64

Ray BK, Bailey CW, Jensen JB, Carson CA. Chromosomes of Babesia bovis and Babesia bigemina. Mol. Biochem. Parasitol. [Internet]. 1992; 52(1):123–126. doi: https://doi.org/cczhx5

Universidad de Cuenca, GAD Municipal de Girón. Plan de Desarrollo y Ordenamiento Territorial del Cantón Girón (2015–2019). Tomo I. Diagnóstico medio físico [Internet]. 2021 [Consultado 22 Ago. 2022]; Cap. 2.1. p. 2.1.1–2.1.96. Disponible en: https://goo.su/5UdkAjT

Arboleda–García MA. Diagnóstico molecular y prevalencia de Babesia spp. mediante PCR–RFLP en ganado bovino de la provincia de Manabí – Ecuador. [tesis de maestría en Internet]. Sangolquí, Ecuador: Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE; 2019 [consultado 10 Mar. 2023]. 72 p. Disponible en: https://goo.su/x7jE

Sanger F, Nicklen S, Coulson AR. DNA sequencing with chain–terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. [Internet]. 1977; 74(12):5463–5467. doi: https://doi.org/dgsrk5

Kumar S, Stecher G, Li M, Knyaz C, Tamura K. MEGA X: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across Computing Platforms. Mol. Biol. Evol. [Internet]. 2018; 35(6):1547–1549. doi: https://doi.org/gd39d8

Chávez–Larrea MA, Cholota–Iza C, Medina–Naranjo V, Yugcha–Díaz M, Ron–Román J, Martin–Solano S, Gómez–Mendoza G, Saegerman C, Reyna–Bello A. Detection of Babesia spp. in High Altitude Cattle in Ecuador, Possible Evidence of the Adaptation of Vectors and Diseases to New Climatic Conditions. Pathog. [Internet]. 2021;10(12):1593–1606. doi: https://doi.org/mrkj