Desarrollo de un método de detección y cuantificación de residuos de tetraciclina en quesos por cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC)

Development of a method for detection and quantification of tetracyclineresidues in cheese by high-performance liquid chromatography (HPLC)

• Nuri Andrea Merchán-Castellanos Universidad de Boyacá
• Astrid Maribel Aguilera-Becerra Universidad de Boyacá
• Wilfred Edilberto Manrique Universidad de Boyacá

Palabras clave: Cr o m a t o g r a f í a l í q u i d a d e a l t a p r e c i s i ó n ( H P L C ), queso, tetraciclina, antibacterianos

Resumen

El objetivo del estudio fue desarrollar una metodología de alta precisión que permitiera detectar y cuantificar residuos de tetraciclina en quesos aplicando la técnica analítica de cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC). Como resultado se generó un método mediante el cual se detectaron residuos de tetraciclina en matrices biológicas complejas como el queso. Se establecieron condiciones de temperatura (30 °C), longitud de onda (265 nanómetros (nm)), volumen (20 microlitros (μL)) y flujo de inyección (1 mililitro (mL)/minutos(min)), así como la fase móvil utilizada con metanol: acetonitrilo: ácido oxálico (74:13:13% volumen/volumen (v/v)) para la corrida en el equipo HPLC. Se obtuvieron curvas de calibración con coeficiente de determinación (R2) próximos a 1, con concentraciones de soluciones estándar de 2,0 partes por millón (ppm), 1,5 ppm, 1,0 ppm, 0,8 ppm, 0,6 ppm, 05 ppm, para tetraciclina. El método presentó límites de cuantificación para tetraciclina de 0,1 miligramos/Litro (mg/L) y límite de detección de 0,2 mg/L, valores que se encuentran por debajo de los límites máximos permisibles por la norma colombiana para leches. Por otra parte, se establecieron condiciones para realizar el proceso de extracción de los residuos de antibióticos en matrices biológicas complejas, como buffer, tiempo y temperatura de centrifugación, tipo de cartucho para purificación y reactivo de recuperación entre otras. Se concluye que el porcentaje de recuperación fue adecuado y se evidencia que el método permite la detección de los residuos de antibióticos a partir de muestras biológicas.

Citas

ABBASI, M; BABAEI, H; ANSARIN, M; NOURDADGAR, AO; NEMATI, M. Simultaneous determination of tetracyclines residues in bovine milk samples by solid phase extraction and HPLC-FL method. Adv. Pharm. Bull. 1: 34-39. 2011.

AGUILERA, C; HERRERA, C; PONCE, J. Determinación de oxitetraciclina en salmonídeos Implementación, validación y aplicación de un nuevo método para la determinación de oxitetraciclina por HPLC en tejido muscular de salmonídeos. J. Aquat. Res. 38: 227-233.2010.

ANDRADE-EIROA, A; CANLE, M; LEROY-CANCELLIERI, V; CERDÀ, V; Solid-phase extraction of organic compounds: a critical review. part I. trac-Trend. Anal. Chem. 80: 641- 654. 2016.

BOULTIF, L; ZEGHILET, N; CHEBIRA, B; AGABOU, A; MEKROUD, A. Validation of a high performance liquid chromatography (HPLC) method for the determination of oxytetracycline residues in milk. Adv. Anim. Vet .Sci. 2: 574-581. 2014.

BRANDSTETEROVA, E; KUBALEC, P; BOVANOVA, L; SIMKO, P; BEDNARIKOVA, A; MACHACKOVA, L. SPE and MSPD as pre-separation techniques for HPLC of tetracyclines in meat, milk and cheese. Z. Lebensm. Unters. F A. 205: 311-315. 1997.

DENOBILE, M; NASCIMIENTO, E. Validação de método para determinação de resíduos dos antibióticos oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina e doxiciclina em leite por cromatografia líquida de alta eficiência. Rev. Bras. Cien. Farm. 40: 209-218. 2004.

DLUHOŠOVÁ, S; KANIOVÁ, L; BORKOVCOVÁ, I; VORLOVÁ, L. A study of changes in the concentrations of tetracycline antibiotics in honey. J. Food Sci. Tech .Mys. 1: 25-27. 2016.

FRANCO, J; ROMERO, M; TABORDA, G. Determinación de niveles residuales de tetraciclina en canales bovinas por la técnica de ELISA en el frigorífico Friogan (La Dorada). Biosalud. 7: 47-55. 2008.

FREITAS, A; BARBOSA, J; RAMOS, F. Multidetection of antibiotics in liver tissue by ultra-high-pressure- liquid-chromatography–tandem mass spectrometry. J. Chromatogr. B. 22: 49-54. 2015.

FURUSAWA, N. Rapid liquid chromatographic determination of oxytetracycline in milk. J. Chromatogr. A. 839: 247-251. 1999.

FURUSAWA, N. Simplified liquid-chromatographic determination of residues of tetracycline antibiotics in eggs. J .Chromatogr. 53: 47-50. 2001.

INTERNACIONAL BUSSINES MACHINES (IBM) CORP. Released 2015. IBM SPSS Statistics for Windows, Version 23.0. Armonk, NY: IBM Corp.

KUMAR, V; GUPTA, J. Synthesis of policies among stakeholders to combat antimicrobial resistance in livestock animals: Indian perspective. J. Pharmacol. Phytoch. 7: 3649-3653. 2018.

MEINERTZ, JR. Liquid chromatographic determination of oxytetracycline in edible fish fillets from six species of fish. JAOAC. Int. 81: 702-708. 1998.

MINISTERIO DE SALUD Y PROTECCIÓN SOCIAL. Resolución N.° 00001382 de 2 de mayo de 2013. En Línea : https://www.minsalud.gov.co/sites/hrid/Lists/ BibliotecaDigital/RIDE/DE/DIJ/resolucion-1382-de-2013. pdf. 22 Julio 2020.

MIRZAEI, R; YUNESIAN, M; NASSERI, S; GHOLAMI, M; JALILZADEH, E; SHOEIBI, S; BIDSHAHI, HS. An optimized SPE-LC-MS/MS method for antibiotics residue analysis in ground, surface and treated water samples by response surface methodology- central composite design. J. Environ. Health Sci. 15: 21. 2017.

NIETO, LE; GIRALDO, R. Tendencies of biotechnology, innovation and development in Colombia. Luna Azul. 41:348-364.2015.

OKA, H; ITO, Y; MATSUMOTO, H. Chromatographic analysis of tetracycline antibiotics in foods. J. Chromatogr. A. 82: 109-133.2000.

ORWA, JD; MATOFARI, JW; MULIRO, PS; LAMUKA, P. Assessment of sulphonamides and tetracyclines antibiotic residue contaminants in rural and peri urban dairy value chains in Kenya. Int. J. Food Contaminat. 4: 5. 2017.

PRADO, CK; FERREIRA, FD; BANDO, E; MACHINSKI, M. Oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline and doxycycline in pasteurised cow’s milk commercialised in Brazil. Food Addit. Contam .B. 8: 81-84. 2015.

RAMIREZ - LOPEZ, C. Physical properties of foods View project Physical properties of dairy products View project. 2012. Universidad de las Américas Puebla. On Line: https:// www.researchgate.net/publication/303959697. 8 Julio 2020.

SENYUVA, H; OZDEN, T; SARICA, DY. High-performance liquid chromatographic determination of oxytetracycline residue in cured. Turk .J. Chem. 4: 395-400. 2000.

STOLKER, AAM; BRINKMAN, UAT. Analytical strategies for residue analysis of veterinary drugs and growth- promoting agents in food-producing animals—a review. J. Chromatogr.A. 1067: 15-53.2015.

TORRES, M. Determinación de niveles de tetraciclina y oxitetraciclina en leche cruda en la Asociación Copla (corporación productora de leche de Alóag) de la parroquia Alóag del cantón Mejía. Univ. Central del Ecuador. Tesis de Grado .82 pp. 2015.

BRICEÑO FEREIRA, E; DEL C, BRITO; ECHENIQUE, R.; DÍAZ RIVERA, H; Y, COLINA MARTINEZ; MANIGLIA MÉRIDA, G. C; & ARRIETA MENDOZA, D. 2019. Determinación de residuos de cloranfenicol y sulfamidas en leches de larga duración, en la ciudad de Maracay , Venezuela. Revista Científica De La Facultad De Ciencias Veterinarias De La Universidad Del Zulia, 28(2), 121 - 128. Recuperado a partir de https://produccioncientificaluz.org/ index.php/cientifica/article/view/29200

VIÑAS, P; BALSALOBRE, N; LÓPEZ-ERROZ, C; HERNÁNDEZ-CÓRDOBA, M. Liquid chromatography with ultraviolet absorbance detection for the analysis of tetracycline residues in honey. J .Chromatogr. A. 1022: 125-129. 2004.

WILSON, JS; OTSUKI, T; MAJUMDSAR, B; Balancing food safety and risk: do drug residue limits affect international trade in beef J .Int. Trade. Econ. Dev. 2: 37-402. 2003.

ZHOU, J; XUE, X; LI, Y; ZHANG, J; CHEN, F; WU, L; CHEN, L; ZHAO, J. Multiresidue determination of tetracycline antibiotics in propolis by using HPLC-UV detection with ultrasonic-assisted extraction and two-step solid phase extraction.Food Chem.115: 1074-1080. 2009.