Protocolo sencillo para la extracción de ADN genómico de tejido de oreja del ratón y la rata, usando la enzima bromelina
Resumen
Los métodos usados para el genotipeo de los animales de laboratorio incluye el aislamiento del ácido Dexosirribonucleíco (ADN) de biopsias de tejido, seguidas de la amplificación mediante la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (RCP). Es importante para el desarrollo de esta técnica, poder contar con un molde de ADN de óptima calidad. La bibliografía reporta distintos métodos de extracción de diferentes tipos de tejidos, algunos basados en la hidrólisis con proteinasas, otros en exposición a ultrasonidos y otros usando detergentes o álcalis. Los métodos que utilizan la hidrólisis con proteinasas tienen como principio básico el uso de la proteinasa K, la cual digiere proteínas y remueve contaminantes a partir de las preparaciones de ácidos nucleicos. En este trabajo se propone la sustitución de la proteinasa K por la enzima Bromelina, la cual es una enzima digestiva proteolítica que contiene azufre y que es extraída del tallo y fruta de la piña (Ananas comosus(L) Merr. Bromeliáceas). El ensayo realizado permitió obtener un ADN de alta calidad, con una relación de absorbancia de 1,6-1,9, tanto para el ADN extraído de tejido de piel de oreja de ratón como de rata, encontrándose bandas en las pruebas de electroforesis de aproximadamente 23 Kb., bien definidas. El ADN extraído del tejido de oreja, tanto de ratón como de rata, fue probado para amplificar microsatélites mediante la técnica de la RCP. Los resultados obtenidos permiten proponer el uso de esta enzima como alternativa en la purificación de ADN, abaratando el proceso.
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