Transgénesis Mediada por Espermatozoides en la Especie Porcina: Efecto de la Presencia de ADN Exógeno Sobre la Calidad Seminal y Evaluación de la Producción In vivo de Embriones Transgénicos

• Francisco Alberto García Vázquez Departamento de Fisiología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia
• Salvador Ruiz Departamento de Fisiología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia
• Luis Alberto Grullón Departamento de Fisiología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia
• Aitor de Ondiz Departamento de Fisiología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia
• Alfonso Gutiérrez Adán Departamento de Fisiología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia
• Joaquín Gadea Departamento de Fisiología, Facultad de Veterinaria, Universidad de Murcia

Resumen

Una alternativa biotecnológica para la producción de animales transgénicos es la transgénesis mediada por espermatozoides (SMGT), basada en la habilidad de las células espermáticas de unir e interiorizar ADN exógeno. En este estudio se plantearon dos objetivos principales: 1) evaluar el efecto de la presencia de ADN exógeno sobre la calidad seminal y 2) evaluar la eficiencia en la producción de embriones transgénicos porcinos in vivo mediante inseminación intrauterina quirúrgica con espermatozoides incubados con el transgén. Para alcanzar estos objetivos, los espermatozoides (libres de plasma seminal) fueron incubados en presencia del transgén EGFP (proteína verde fluorescente) durante 2 h a 16°C (en una relación de 108 cels/mL y 5 μg ADN/mL). Se valoró la motilidad, motilidad progresiva e integridad de membrana de los espermatozoides incubados, en presencia o ausencia del transgén. Los resultados mostraron que la presencia del ADN no afectó a ninguno de los parámetros seminales estudiados. Con muestras seminales incubadas con el transgén se llevaron a cabo inseminaciones intrauterinas mediante laparotomía en 4 hembras prepúberes. A los 6-7 días tras la inseminación se recolectaron los embriones, para evaluar la tasa de fecundación y la expresión de la proteína verde fluorescente EGFP en los mismos. El número medio de cuerpos lúteos por cerda fue de 10,50 Ó 2,90 con una tasa de recolección de 11,90%. Se recolectó un total de 5 embriones presentando todos ellos un estado normal de desarrollo y una alta calidad (dos de ellos presentaban más de 400 células por embrión). Cuando fue analizada la expresión mediante microscopia de fluorescencia, ninguno de ellos expresaba la proteína EGFP. Este resultado, bajo las condiciones experimentales del presente estudio, podría indicar que el transgén se una en su mayoría a espermatozoides con baja viabilidad por lo que la probabilidad de que los espermatozoides vivos unan el ADN y sean capaces de fecundar en comparación con espermatozoides sin el transgén es realmente baja.