Utilización de las tarjetas FTA® para el diagnóstico molecular del virus de la enfermedad de Newcastle en muestras de fluido alantoideo

• Francisco Perozo Universidad del Zulia-Venezuela
• Pedro Villegas University of Georgia-Estados Unidos
• Iván Alvarado University of Georgia-Estados Unidos
• Carlos Estévez Southeastern Poultry Research Laboratory-Estados Unidos
• Sergio Rivera Universidad del Zulia-Venezuela
• Yaneth Mavárez Universidad del Zulia-Venezuela

Palabras clave: virus de la enfermedad de Newcastle, tarjetas FTA, inactivación, detección molecular

Resumen

Se evaluó la factibilidad de utilizar las tarjetas FTA® (Flinders Technology Associates) para la inactivación y transporte de fluido alantoideo infectado con el virus de la enfermedad de Newcastle (VEN). La tarjetas FTA® fueron impregnadas con diluciones seriadas de fluido alantoideo con un título inicial de 10,8.8 DL/50 del VEN cepa LaSota y analizadas mediante la prueba de reacción en cadena por la polimerasa transcriptasa reversa (por sus siglas en ingles RT-PCR) a las 24 horas, 7 y 14 días. La concentración más baja del virus detectada en el fluido alantoideo fue 10,5.8 DL/50. La detección del virus a partir de la tarjeta fue posible hasta 14 días después de su inactivación. El re-aislamiento viral en huevos embrionados a partir de las tarjetas resultó negativo. La inactivación del virus en las tarjetas no afectó la calidad de la secuencia de nucleótidos, permitiendo la determinación de su virulencia mediante la secuenciación de los nucleótidos que codifican la zona de corte de la proteína de fusión resultando ser lentogénico en concordancia con la cepa inicial de virus aplicada a las tarjetas. Se concluye que las tarjetas FTA® representan una alternativa válida para el muestreo, inactivación y diagnóstico molecular del VEN, con un alto grado de bioseguridad.