Optimización del cultivo de Entamoeba histolytica/dispar con el uso de Imipenem
Abstract
Para el cultivo de amiba se utilizan diversos medios que emplean antibióticos para controlar el crecimiento bacteriano. El Imipenem, antibiótico betalactámico, actúa sobre la mayoría de los gérmenes presentes como flora fecal. Se optimizó el cultivo de Entamoeba histolytica/dispar (EH/ED) utilizando Imipenem, comprobar la viabilidad de la amiba con este antibiótico y extraer el ADN amibiano para tipificación. Se inocularon 22 tubos con el medio de Boeck y Drbohlav con 1 g de heces positivas para EH/ED, a 12 de ellos se agregó 200 µL de Imipenem (25 mg/mL) al inicio y 50 µL diarios y a los 10 restantes 150 µL de una combinación de Penicilina, Amikacina y Eritromicina (50 µL de cada uno). Se verificó el crecimiento y viabilidad parasitaria mediante tinción con eosina al 1% y contaje en cámara de Neubawer a las 24, 48, 72 horas y 7mo día, con resiembra y lecturas en iguales intervalos. Se extrajo el ADN mediante Kit Wizar SV Genomic de Promega í’ y se amplificó con iniciadores genéricos. Se obtuvo una diferencia significativa entre el número de parásitos vivos de los cultivos con Imipenem = 6,6x106, 11x106, 17x106 y 21x106 vs. la combinación de Penicilina, Amikacina y Eritromicina = 1x106, 2,8 x106, 3,3x106 y 3,3x106 a las 24, 48, 72 horas y 7° día respectivamente (p < 0,05). Se realizó la extracción del ADN y se amplificó con iniciadores genéricos obteniendo una banda de 1076pb. El uso de Imipenem para el cultivo de EH/ED permite obtener un crecimiento óptimo, mantener la viabilidad del mismo por tiempo prolongado, y la obtención de ADN amibiano de óptima calidad para su uso en biología molecular, evitando el uso de combinaciones de antibióticos.
