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______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 240 - 278, 2023
Cloned bualo bulls and their somatic cell do-
nor bulls exhibit similar in-vitro embryo produc-
tion eciency
Tanya Gupta, Gaurav Tripathi, Sonal Gupta,
Naresh L. Selokar, Manoj Kumar Singh*
Embryo Biotechnology Lab, Animal Biotechnology Division
ICAR- National Dairy Research Institute, Karnal-132001,
India
*Corresponding author: Manoj Kumar Singh (manoj.singh@icar.res.in)
ABSTRACT
Somatic cell nuclear transfer (SCNT) has emerged as a
valuable assisted reproductive technology for faster multipli-
cation of animals. This helps to preserve the valuable supe-
rior germplasm. The cloning of superior sires and their use in
breeding programs helps rapidly disseminate superior genetics
in animal populations. However, questions remain regarding
cloned bulls’ fertility status compared to their somatic cell do-
nor bulls, especially in bualoes. We studied the semen kinetic
parameters and in vitro fertilization (IVF) rate of frozen-thawed
cloned bulls’ semen (n=2) compared to those of somatic cell
donor bulls’ semen (n=2). The kinematics were studied using
a Computer Assisted Semen Analyzer (CASA; IVOS II, IMV,
France). Semen from cloned bulls vs. donor bulls showed pro-
gressive motility with distance average path (17.70 ± 0.835 vs.
18.72 ± 0.53 µm), distance curvilinear (28.30 ± 2.85 vs. 31.61 ±
1.71 µm), distance straight line (15.89 ± 0.56 vs. 16.36 ± 0.20
µm), velocity average path (74.84 ± 7.23 vs 69.59 ± 9.96 µm/s),
velocity curvilinear (113.77 ± 15.28 vs 113.49 ± 16.94 µm/s),
and velocity straight line (66.71 ± 6.01 vs. 61.94 ± 9.13 µm/s).
This suggested that the kinematic parameters of cloned bull
semen were not signicantly dierent (p<0.05) from those of
the somatic cell donor bull semen. Furthermore, cloned and
donor bull semen was used for IVF to assess the blastocyst
production rate. Immature oocytes were matured in vitro for
24 h in a humidied CO2 incubator (5% CO2 in air; RH>95%)
at 38.5°C. After 24 h, mature oocytes were co-incubated with
processed semen in the fertilization Bracket and Oliphant (BO)
medium for 18 h. The presumptive zygotes were cultured in
Research Vitro Cleavage medium (RVCL; Cook, Australia) for
up to 8 days. The cleavage and blastocyst rates for cloned
bulls, 68.72 ± 0.72% and 14.11 ± 1.89%, respectively, did not
dier signicantly (p<0.05) from those of the donor bulls, i.e.,
67.44 ±0.16% and 13.96 ± 1.24%, respectively. Furthermore,
Los toros bufalinos clonados y sus donantes de cé-
lulas somáticas exhiben una eciencia de produc-
ción de embriones in vitro similar
Tanya Gupta, Gaurav Tripathi, Sonal Gupta,
Naresh L. Selokar, Manoj Kumar Singh*
Laboratorio de Biotecnología de Embriones, División de
Biotecnología Animal
ICAR- Instituto Nacional de Investigación Láctea,
Karnal-132001, India
*Autor de correspondencia: Manoj Kumar Singh (manoj.singh@icar.res.in)
RESUMEN
La transferencia nuclear de células somáticas (SCNT)
se ha convertido en una valiosa tecnología de reproducción
asistida para una multiplicación más rápida de los animales.
Esto ayuda a preservar el valioso germoplasma superior. La
clonación de toros superiores y su uso en programas de repro-
ducción ayuda a difundir rápidamente una genética superior en
las poblaciones animales. Sin embargo, quedan dudas sobre
el estado de fertilidad de los toros clonados en comparación
con sus toros donantes de células somáticas, especialmente
en los búfalos. Estudiamos los parámetros cinéticos del semen
y la tasa de fertilización in vitro (FIV) del semen de búfalos
reproductores clonados congelados-descongelados (n=2) en
comparación con los del semen de búfalos donantes de cé-
lulas somáticas (n=2). La cinemática espermática se estudió
utilizando un analizador de semen asistido por computadora
(CASA; IVOS II, IMV, Francia). El semen de toros clonados
vs. toros donantes mostró motilidad progresiva con distancia
trayectoria promedio (17.70 ± 0.835 vs. 18.72 ± 0.53 µm), dis-
tancia curvilínea (28.30 ± 2.85 vs. 31.61 ± 1.71 µm), distan-
cia línea recta (15.89 ± 0.56 vs. 16,36 ± 0,20 µm), velocidad
de trayectoria promedio (74,84 ± 7,23 frente a 69,59 ± 9,96
µm/s), velocidad curvilínea (113,77 ± 15,28 frente a 113,49 ±
16,94 µm/s) y velocidad en línea recta (66,71 ± 6,01 frente a
61,94 ± 9,13 µm/s). Esto sugirió que los parámetros cinemáti-
cos del semen de toro clonado no eran signicativamente di-
ferentes (p<0,05) de los del semen de toro donado de células
somáticas. Además, se utilizó semen de toro clonado y donado
para la FIV para evaluar la tasa de producción de blastocis-
tos. Los ovocitos inmaduros se maduraron in vitro durante 24 h
en una incubadora de CO2 humidicada (5% de CO2 en aire;
RH>95%) a 38,5°C. Después de 24 h, los ovocitos maduros
se incubaron conjuntamente con el semen procesado en el
R-130 Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 253-254, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc103
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13th World Bualo Congress ~ 13er Congreso Mundial de Búfalos / Posters / Reproduction _______________________________________
medio de fertilización Bracket y Oliphant (BO) durante 18 h.
Los presuntos cigotos se cultivaron en medio Research Vitro
Cleavage (RVCL; Cook, Australia) durante 8 días. Las tasas
de escisión (clivaje) y blastocisto de los toros clonados, 68,72
± 0,72% y 14,11 ± 1,89%, respectivamente, no dirieron signi-
cativamente (p<0,05) de las de los toros donantes, es decir,
67,44 ±0,16% y 13,96 ± 1,24%, respectivamente. Además, la
expresión de genes relacionados con la pluripotencia (OCT4,
SOX2 y NANOG) fue similar en los blastocistos producidos en
ambos grupos experimentales. Por lo tanto, las características
del semen y la tasa de producción de embriones in vitro de
los toros bufalinos clonados son similares a las de sus toros
donantes de células somáticas. Este estudio preliminar sugiere
que los ganaderos pueden utilizar semen de toros clonados
para programas de inseminación articial y otros procedimien-
tos de reproducción asistida.
Palabras clave: búfalo, Semen, FIV, blastocisto.
Reconocimiento: Este trabajo fue apoyado nancieramente
por Bualo Cloning Project (NASF/BGAM(SM)-9001/2022-23)
ICAR-NASF, Nueva Delhi.
the expression of pluripotency-related genes (OCT4, SOX2,
and NANOG) was similar in blastocysts produced in both ex-
perimental groups. Thus, the semen characteristics and in vitro
embryo production rate of cloned bulls are like those of their
somatic cell donor bulls. This preliminary study suggests that
farmers can use semen from cloned bulls for Articial Insemi-
nation programs and other ART procedures.
Keywords: bualo, semen, IVF, blastocyst.
Acknowledgement: This work was nancially supported by
Bualo Cloning Project (NASF/BGAM(SM)-9001/2022-23)
ICAR-NASF, New Delhi.
