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______________________________________________________ Revista Cientíca, FCV-LUZ / Vol. XXXIII, Supl. Esp., 213 - 239, 2023
Experimental use of mycobacterial antigens in
tuberculin skin test on water bualo
Alessandra Martucciello1, Federica Signorelli 2,
Piera Mazzone3, Francesco Grandoni 2,
Giovanna Cappelli 1*, Lucia Boccia4, Giuseppe Parente4,
Monica Cagiola3, Maria Beatrice Boniotti 5,
Esterina De Carlo1, Francesco Napolitano2,
Giorgio Galiero1
1 National Reference Centre for Hygiene and Technology
of Breeding and Buffalo Production, Istituto Zooprolattico
Sperimentale del Mezzogiorno, Salerno, Italy.
2 Council for Agricultural Research and Economics - Animal
Production and Aquaculture, Monterotondo, Italy.
3 Istituto Zooprolattico Sperimentale dell’Umbria e delle
Marche “Togo Rosati”, Perugia, Italy.
4 Azienda Sanitaria Locale Salerno, Salerno, Italy.
5 National Reference Centre for Bovine Tuberculosis, Istituto
Zooprolattico Sperimentale della Lombardia e dell’Emilia
Romagna, Brescia, Italy.
*Corresponding author: Giovanna Cappelli
(giovanna.cappelli@izsmportici.it).
ABSTRACT
In Italy, bovine tuberculosis (TB) control in the water buf-
falo population is mainly carried out using the tuberculin skin
test (TST). The test measures the increase in skin thickness
72 hours (h) after the intradermal injection of mycobacterial pu-
ried protein derivatives (PPD). The TST can involve the single
intradermal test with bovine PPD (PPDB), or the comparative
test adding a second injection with avian tuberculin (PPDA),
using the couple of PPDs reduces false positives caused by
non-tuberculosis mycobacteria. This pilot study aimed to eval-
uate the potential use of PPDB, PPDA, along with 6 kDa early
secretory antigenic target (ESAT-6), 10 kDa culture ltrate pro-
tein (CFP-10), and Early Secretory Proteins (ESP) in the TST,
in healthy and naturally TB infected bualoes. Twenty-one buf-
faloes, gamma-interferon (IFN-γ) test positive, from a TB-out-
break herd and 11 bualoes from a TB-free herd were select-
ed. All subjects were also submitted to the IFN-γ test using the
same antigens (Ag) as the TST to verify the cellular response
in vitro and to exclude anaergic animals that did not respond to
in vitro stimulation with the mitogen. The TST was performed
according to the TB Italian National eradication program, and to
Reg. EU 2020/689. Eight intradermal injection sites were used
on each animal shoulder (4 on the right and 4 on the left side).
Three concentrations of the ESAT6-CFP10 protein cocktail (10,
20 and 30 µg) and two of ESP (50 and 100 µg) were inoculated.
PPDB and PPDA were always included in the TST, along with
PBS as negative control. Skin reactions were measured with
Uso experimental de antígenos micobacterianos
en la prueba cutánea de tuberculina en búfalos de
agua
Alessandra Martucciello1, Federica Signorelli2,
Piera Mazzone3, Francesco Grandoni2,
Giovanna Cappelli1*, Lucia Boccia4, Giuseppe Parente4,
Monica Cagiola3, Maria Beatrice Boniotti5,
Esterina De Carlo1, Francesco Napolitano2,
Giorgio Galiero1
1 Centro Nacional de Referencia para la Higiene y Tecnología
de la Cría y Producción del Búfalo, Istituto Zooprolattico
Sperimentale del Mezzogiorno, Salerno, Italia.
2 Consejo de Investigación y Economía Agrícola - Producción
Animal y Acuicultura, Monterotondo, Italia.
3 Istituto Zooprolattico Sperimentale dell’Umbria e delle
Marche “Togo Rosati”, Perugia, Italia.
4 Azienda Sanitaria Locale Salerno, Salerno, Italia.
5 Centro Nacional de Referencia para la Tuberculosis Bovina,
Istituto Zooprolattico Sperimentale della Lombardia e
dell’Emilia Romagna, Brescia, Italia.
*Autor de correspondencia: Giovanna Cappelli
(giovanna.cappelli@izsmportici.it).
RESUMEN
En Italia, el control de la tuberculosis bovina (TB) en la
población de búfalos de agua se lleva a cabo principalmente
mediante la prueba cutánea de la tuberculina (PT). La prueba
mide el aumento del grosor de la piel 72 horas (h) después
de la inyección intradérmica de derivados proteicos puricados
(PPD) de micobacterias. La PT puede implicar la prueba intra-
dérmica única con PPD bovino (PPDB), o la prueba compara-
tiva añadiendo una segunda inyección con tuberculina aviar
(PPDA). El uso de un par de PPD reduce los falsos positivos
causados por micobacterias no tuberculosas. Este estudio pilo-
to tuvo como objetivo evaluar el uso potencial de PPDB, PPDA,
junto con un objetivo antigénico secretorio temprano de 6 kDa
(ESAT-6), una proteína ltrada de cultivo de 10 kDa (CFP-10)
y proteínas secretoras tempranas (ESP) en la TST, en búfalos
sanos y naturalmente infectados con tuberculosis. Se seleccio-
naron veintiún búfalos con resultados positivos para interferón
gamma (IFN-γ) de un rebaño con brote de tuberculosis y 11
búfalos de un rebaño libre de tuberculosis. Todos los sujetos
también fueron sometidos a la prueba de IFN-γ utilizando los
mismos antígenos (Ag) que la TST para vericar la respuesta
celular in vitro y excluir animales anaérgicos que no respondie-
ron a la estimulación in vitro con el mitógeno. La PT se realizó
según el programa nacional italiano de erradicación de la tu-
berculosis y el Reg. UE 2020/689. Se utilizaron ocho sitios de
inyección intradérmica en cada hombro de animal (4 en el lado
AHOH-175 Rev. Cientif. FCV-LUZ, XXXIII, SE, 225-226, 2023, https://doi.org/10.52973/rcfcv-wbc084