Caracterización parcial de una actividad fosfatasa alcalina excretada por Bacillus stearothermophilus
Resumen
La fosfatasa alcalina (AP; EC 3.1.3.1) desfosforila compuestos monofosfatados a pH básico y es usada en estuches comerciales para el diagnóstico de enfermedades hepáticas, intestinales, óseas y endocrinas (hiperparatiroidismo). Una actividad AP excretada al medio de cultivo por Bacillus stearothermophilus fue aislada, identificada, purificada parcialmente y caracterizada. Las bacterias fueron inoculadas en medio líquido con triptona, extracto de levadura, adenosin-5-monofosfato y tampón glicina de sodio pH 10 a 55°C. La actividad AP obtenida de un filtrado libre de células luego de 120 h de cultivo, fue ensayada con 2 mM p-nitrofenilfosfato en 50 mM tampón glicina de sodio, pH 10 y 1,5 mM MgCl2. A los 20 min de incubación, la reacción fue detenida con 0,2 M NaOH y se cuantificó la liberación de p-nitrofenol a 410 nm. La AP fue purificada parcialmente por DEAE-celulosa, con una actividad específica de 0,3 µmol·min”“1·mg. La actividad fue máxima a 60°C y pH 10, aunque se registró actividad hasta 80°C. La actividad AP fue estimulada por 1 mM MgCl2 e inhibida por 0,1 mM ZnCl2, 0,1 mM EDTA y 10 mM fosfato inorgánico. Se determinó un peso molecular (PM) de ~90 kDa mediante zimografía. Los resultados indican que la enzima aislada pudiera ser relevante en aplicaciones industriales, clínicas y biotecnológicas, por su resistencia térmica y alcalina.
