Escrutinio de una biblioteca genómica de Musa acuminata (AA) con sondas de expresión tejido específicas
Resumen
Una de las limitaciones en la aplicación de la biotecnología en Musa es la escasez de conocimientos de sus genes y de las complejas interacciones que influyen en la expresión de los rasgos cuantitativos más importantes en la planta. El análisis de bibliotecas genómicas BIBAC permite capturar genes de interés y estudiar su función, mediante la transformación genética directa con grandes fragmentos de ADN y el análisis del fenotipo de los transgénicos obtenidos. En este trabajo se identificaron clones BIBAC utilizando sondas homólogas y heterólogas de expresión tejido específicas: a) Una proteína del fotosistema II, PbsR de 10kDa de expresión específica en hojas de arroz (GenBank CA762808), b) Un gen de arroz inducible “Elicitor Responsive Gen” (ERG GenBank D24373) y c) Un fragmento amplificado por PCR con oligonucleótidos específicos del gen de taumatina (Genbank AF001528), en cv. Gran Enano (AAA). Mediante análisis northern blot se verificó la expresión de cada una de las sondas en diferentes tejidos del cv. Gran Enano (AAA). La sonda de PbsR mostró una expresión específica en hoja, mientras que la ERG no fue detectada en ninguno de los tejidos analizados. Respecto a la sonda de taumatina se encontró expresión en cáscara y fruto. Tres membranas de la biblioteca genómica conteniendo 4.608 fragmentos de ADN clonado, fueron hibridadas utilizando procedimientos estándares para sondas con marcaje radiactivo [a-32P] dCTP. Las condiciones de hibridación y lavados fueron de alta astringencia. De 13.824 clones BIBAC revisados con cada sonda se identificaron: seis clones con la sonda de hoja (PbsR), un clon con la sonda ERG y veinte clones positivos para la sonda de taumatina. En este trabajo se discuten las posibles aplicaciones de los clones BIBAC identificados. A este respecto se pretende la caracterización de secuencias promotoras tejido específico y secuencias terminadoras que sirvan para el diseño de nuevos vectores aplicables en el mejoramiento genético de Musa.
