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Rev. Fac. Agron. (LUZ). 2021, 38(4): 867-886. Octubre-Diciembre.
DOI: https://doi.org/10.47280/RevFacAgron(LUZ).v38.n4.07 ISSN 2477-9407
Esta publicación científica en formato digital es continuación de la Revista Impresa: Depósito legal pp 196802ZU42, ISSN 0378-7818.
Recibido: 07-12-2020 . Aceptado: 22-02-2021
*Autor de correspondencia. Correo electrónico: wceiroc@gmail.com
Antagonismo de Trichoderma harzianum y
Trichoderma viride sobre aislados de Fusarium
spp. procedentes de Nicotiana tabacum
Antagonism of Trichoderma harzianum and Trichoderma
viride on isolates of Fusarium spp. from Nicotiana
tabacum
Antagonismo de Trichoderma harzianum e Trichoderma
viride em isolados de Fusarium spp. de Nicotiana tabacum
Wilson Geobel Ceiro-Catasú
1*
, Yusel Vega-González
1
, María
Eulalia Taco-Sánchez
2
, Ramiro Remigio Gaibor-Fernández
3
,
Oandis Sosa-Sánchez
1
1
Departamento Agronomía, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Granma,
Cuba. Carretera a Manzanillo Km 17
1/2
Peralejo - Apartado 21 - Bayamo M. N. CP 85100.
Correo electrónico: (WC) wceiroc@gmail.com, (OS) oandis.sosa@gmail.com, .
2
Empresa
JATUNCUY, Ecuador. Provincia Cotopaxi. Correo electrónico: eulaliataco@gmail.com, .
3
Docente de la Carrera de Agronomía, Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Ecuador.
Ave. Carlos J. Arosemena 38, Quevedo, Ecuador. Correo electrónico: rgaibor@uteq.edu.ec,
.
Resumen
La producción tabacalera es un renglón fundamental en la economía cubana
y genera el mayor ingreso en el sector agrícola. Dentro de los topatógenos que
afectan a esta planta, Fusarium spp., constituye una plaga de interés, debido
a las afectaciones vasculares que provocan deterioro del valor comercial de
la hoja. Por tanto, la investigación se realizó con el objetivo de determinar la
actividad antagónica in vitro de cepas autóctonas de Trichoderma harzianum y
T. viride sobre aislados de Fusarium oxysporum y F. phyllophylum, procedentes
de Nicotiana tabacum L. en la provincia Granma, Cuba. El trabajo se realizó en
el Laboratorio de Microbiología Agrícola, Universidad de Granma. Se preparó
medio agar papa dextrosa para establecer los cultivos duales de Trichoderma
spp. vs. Fusarium spp. Una vez establecidos los tratamientos y transcurrido el
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tiempo de incubación se procedió a determinar el porcentaje de inhibición del
crecimiento micelial, la capacidad antagónica y la actividad micoparasítica. Se
utilizó un diseño completamente aleatorizado con cuatro réplicas por tratamiento
y para el procesamiento estadístico se usó un ANOVA bifactorial y la prueba
de Tukey (p≤0,05). Se evidenció que las cepas de Trichoderma spp., registraron
valores intermedios de inhibición del hongo, la competitividad del antagonista
se ubicó mayoritariamente en la clase dos de la escala de Bell y se constató que,
penetración, enrollamiento, vacuolización, deformación y granulación constituyen
las principales formas de micoparasitismo. Lo cual señala a este método de
biocontrol como una alternativa a tener en cuenta para el manejo de Fusarium
spp., en agroecosistemas tabacaleros.
Palabras clave: Trichoderma spp., antagonismo, antibiosis, micoparasitismo,
tabaco, fusariosis.
Abstract
Tobacco production is a key line in the Cuban economy and generates the
largest income in the agricultural sector. Within phytopathogens affecting this
plant, Fusarium spp., constitutes a pest of interest, due to vascular involvements
that cause deterioration of the commercial value of the leaf. Therefore, the research
was carried out with the aim of determining the antagonistic activity in vitro of
native strains of Trichoderma harzianum and T. viride on isolates of Fusarium
oxysporum and F. phyllophylum, from Nicotiana tabacum L. in Granma province,
Cuba. The work was carried out at the Laboratory of Agricultural Microbiology,
University of Granma. Half dextrose potato agar was prepared to establish the
dual crops of Trichoderma spp. vs. Fusarium spp. Once the treatments were
established and the incubation time had elapsed, the percentage inhibition of
mycelial growth, antagonistic capacity and mycoparasitic activity was determined.
A fully randomized design with four replicas per treatment was used and a two
factorial ANOVA and Tukey test (p≤0.05) were used for statistical processing.
It was shown that the strains of Trichoderma spp., recorded intermediate
values of phytopathogenic inhibition, the competitiveness of the antagonist was
mostly located in class two of the Bell scale and it was found that penetration,
winding, vacuolization, deformation and granulation constitute the main forms
of mycoparasitism. Which points to this biocontrol method as an alternative to
consider for the management of Fusarium spp., in tobacco agroecosystems.
Key words: Trichoderma spp., antagonism, antibiosis, mycoparasitism, tabacco,
fusariosis.
Resumo
A produção de tabaco é uma linha-chave na economia cubana e gera o maior
rendimento do sector agrícola. Dentro dos topógenos que afetam esta planta,
a Fusarium spp., constitui uma praga de interesse, devido a envolvimentos
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vasculares que causam a deterioração do valor comercial da folha. Por conseguinte,
a investigação foi realizada com o objetivo de determinar a atividade antagónica
in vitro de estirpes nativas de Trichoderma harzianum e T. viride em isolados de
Fusarium oxysporum e F. phyllophylum, de Nicotiana tabacum L. na província de
Granma, Cuba. O trabalho foi realizado no Laboratório de Microbiologia Agrícola
da Universidade de Granma. Metade dextrose batata agar estava preparado para
estabelecer as duplas culturas de Trichoderma spp. vs. Fusarium spp. Uma vez
estabelecidos os tratamentos e decorrido o tempo de incubação, foi determinada
a percentagem de inibição do crescimento micémico, da capacidade antagónica
e da atividade micoparasiótica. Foi utilizado um desenho totalmente aleatório
com quatro réplicas por tratamento e um teste de ANOVA e Tukey (p≤0.05) para
processamento estatístico. Foi demonstrado que as estirpes de Trichoderma spp.,
registaram valores intermédios de inibição topopogénica, a competitividade do
antagonista situava-se principalmente na classe dois da escala de Sino e vericou-
se que a penetração, o enrolamento, a vacuolização, a deformação e a granulação
constituem as principais formas de micoparaquisite. O que aponta este método de
biocontrolo como uma alternativa a considerar para a gestão da Fusarium spp.,
nos agroecossistemas de tabaco.
Palavras-chave: Trichoderma spp., antagonismo, antibiose, micoparasitismo,
tabaco, fusariose.
Introducción
La provincia Granma es un
territorio eminentemente agropecuario
ubicado al este de Cuba, donde se
establecen diferentes cultivos de interés
económico como caña azúcar, arroz,
cafeto, pastos, tabaco, entre otros. En
el caso especíco del tabaco (Nicotiana
tabacum L.), una parte considerable
de sus producciones se destinan a la
fabricación y la exportación del puro
cubano,
reconocido internacionalmente
por su excelente calidad. No obstante,
esta planta puede ser afectada por
diferentes organismos plagas, entre
ellos destacan los hongos topatógenos
Fusarium oxysporum Schltdl. y F.
phyllophylum Nirenberg & O’Donnell,
causante de infecciones vasculares
que afectan el valor comercial del
tabaco, el cual radica en la calidad de
Introduction
The province of Granma is an
eminently agricultural territory
located in the east of Cuba, where
different crops of economic interest are
established such as, sugar cane, rice,
coffee, pastures, and tobacco, among
others. In the specic case of tobacco
(Nicotiana tabacum L.), a considerable
part of its productions are destined to
the manufacture and the exportation
of Cuban cigars, internationally
recognized for their excellent
quality. However, this plant can be
affected by different pest organisms,
among them the phytopathogenic
Fusarium oxysporum Schltdl. and F.
phyllophylum Nirenberg & O’Donnell,
which cause vascular infections that
affect the commercial value of tobacco,
which depends on the quality of its
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sus hojas y por tanto, todo aquello que
las afecte es importante investigarlo
y ofrecerle una solución localmente
viable (Berruezo et al., 2018).
Fusarium spp., posee una
am
plia distribución, su presencia es
cosmopolita y sobrevive saprótamente
en el suelo, aire, agua y diversos
sustratos. Muchas especies tienen
una gran capacidad para infectar a las
plantas de interés económico y ciertos
biotipos pueden causar infecciones
oportunistas a los animales y al
hombre, atribuidas fundamentalmente
por la producción de micotoxinas
(Chiotta et al., 2015). Debido a
las estructuras de resistencia que
posee, denominadas clamidosporas,
persisten largos periodos de tiempo
en el suelo, lo cual hace inefectiva la
alternativa de manejo basada en la
rotación de cultivos (Delgado-Ortiz
et al., 2016). F. oxysporum es un
organismo muy polífago a nivel de
especie, se cuanticaron más de 120
formas especiales, las cuales se basan
en la infección que produce sobre la
planta hospedera. Dichas formas a
su vez se subdividen en razas, las que
se describen según la habilidad para
infectar diferentes variedades de una
misma especie (Retana et al., 2018).
Para el manejo del marchitamiento
vascular del tabaco se recomienda el
biocontrol como una medida que no
afecta el ambiente. En este sentido,
las especies del género Trichoderma
destacan como las más utilizadas.
Las mismas presentan diferentes
mecanismos de acción, entre ellos,
la competencia, la antibiosis, el
micoparasitismo y la activación de
mecanismos de defensa en las plantas.
leaves and therefore, everything
that affects them is important to
investigate and offer a locally viable
solution (Berruezo et al., 2018).
Fusarium spp., possess a
wide distribution, its presence
is cosmopolitan and survives
saprophytically in soil, air, water and
various substrates. Several species
have a big capacity to infect the plants of
economic interest and certain biotypes
can cause opportunistic infections
to the animals and human being,
mainly attributed by the production of
mycotoxins (Chiotta et al., 2015). Due
to the structures of the resistance that
it has, denominated chlamydospores,
they persist for long periods of time
in the soil, which makes ineffective
the management alternative based
on the crops rotations (Delgado-Ortiz
et al., 2016). F. oxysporum is a very
polyphagous organism at specie level;
120 special forms were quantied,
which are based on the infection that
it produces on the host plant. These
forms are subdivided into races, which
are described according to the ability
to infect different varieties of the same
specie (Retana et al., 2018).
For the management of tobacco
vascular wilt, the biocontrol is
recommended as a measurement
that does not affect the environment.
In this sense, the species of the
genus Trichoderma highlight as the
most used. They present different
mechanisms of action, among them,
the competition, the antibiosis, the
mycoparasitism, and the activation
of defense mechanisms in the
plants. It is known that the higher
is the probability of Trichoderma
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Se conoce que mientras mayor sea la
probabilidad de que Trichoderma spp.,
manieste varios modos de acción;
más eciente y duradero será el efecto
de biocontrol sobre el topatógeno
(Infante et al., 2009; Cruz-Triana et al.,
2017). Las especies de Trichoderma
actúan por medio de una combinación
de competencia por nutrientes, la
producción de metabolitos antifúngicos,
la síntesis de enzimas hidrolíticas y
el micoparasitismo, así como, pueden
inducir la estimulación del crecimiento
vegetal (Carvajal et al., 2015). Como
hongo sapróto del suelo tiene la
característica de fácil multiplicación
y rápido crecimiento en condiciones
controladas, lo cual favorece su
utilización como biofungicida (Rivera
et al., 2016). Los productos basados
en este hongo comprenden más de 50
formulaciones, algunas disponibles
como productos comerciales en el
mercado (Gato, 2010). Sin embargo, no
se constataron estudios sobre el manejo
de Fusarium spp., con cepas nativas de
T. harzianum y T. viride en tabaco, lo
cual sería novedoso investigar para el
biocontrol local de este hongo.
Teniendo en cuenta lo expuesto,
se propuso como objetivo de esta
investigación determinar la actividad
antagónica in vitro de cepas autóctonas
de Trichoderma harzianum y T. viride
sobre aislados de Fusarium spp.,
procedentes de N. tabacum en la
provincia Granma.
Materiales y métodos
La investigación se realizó en
el Laboratorio de Microbiología
Agrícola de la Facultad de Ciencias
spp., manifests various modes of
action; the effect of biocontrol on the
phytopathogen is more efcient and
durable (Infante et al., 2009; Cruz-
Triana et al., 2017). The species of
Trichoderma act through a combination
of competence for nutrients, the
production of antifungals metabolites,
the synthesis of hydrolytic enzymes
and mycoparasitism, as well as, they
can induce plant growth stimulation
(Carvajal et al., 2015). As saprophytic
soil fungus, it has the characteristic of
easy multiplication and rapid growth
under controlled conditions, which
favors its use as a biofungicide (Rivera
et al., 2016). The products based on
this fungus include more than 50
formulations, some of them available
as commercial products in the market
(Gato, 2010). However, there were
not studies on the management of
Fusarium spp. with native strains of
T. harzianum and T. viride in tobacco
were found, which would be novel to
investigate for the local biocontrol of
this fungus.
Considering the above, it was
proposed as the objective of this
research to determine the in vitro
antagonistic activity of autochthonous
strains of Trichoderma harzianum
and T. viride on Fusarium spp. isolates
from N. tabacum in Granma province.
Materials and methods
The research was carried out at the
Agricultural Microbiology Laboratory
of the Faculty of Agricultural Sciences,
University of Granma, Cuba. Potato
dextrose agar medium was prepared
with antibiotic (PDA BioCen: 39 g.L
-1
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Agropecuarias, Universidad de
Granma, Cuba. Se preparó medio agar
papa dextrosa con antibiótico [PDA
BioCen: 39 g.L
-1
de H
2
O destilada,
más cloranfenicol, tetraciclina y
estreptomicina (50 mg.L
-1
) en matraces
Erlenmeyer y pH ajustado a 6]. El
medio se esterilizó y se dejó enfriar
hasta alcanzar una temperatura
de 36 °C y se vertió en placas Petri
de 80 mm de diámetro. Una vez
solidicado, se procedió a establecer
el enfrentamiento en cultivo dual (CD)
según la metodología descrita por Bell
et al. (1982).
Las cepas autóctonas A-53, A-34
de Trichoderma harzianum y TS-3 de
T. viride fueron proporcionadas por
el Laboratorio Provincial de Sanidad
Vegetal (LAPROSAV-Granma), las
mismas fueron aisladas de cultivos
hortícolas agroecológicos en la región
este de Cuba y los aislamientos
nativos de Fusarium spp. (cuadro 1)
se obtuvieron del cultivo de tabaco
(secciones de tallos) en áreas de
producción comercial de esta planta,
estos permanecían conservados en
la colección de topatógenos del
Laboratorio de Microbiología Agrícola,
Universidad de Granma.
En las placas Petri con PDA se
depositó en un extremo de la misma
un disco de cinco mm de diámetro con
micelio activo de colonias de Fusarium
spp. (cuadro 1) y en el otro extremo
se colocó un disco con las cepas de
Trichoderma harzianum y T. viride,
ambas tenían 72 h de crecidas. Luego
las placas fueron selladas con paralm
y se incubaron a 28±2 °C, con intervalos
de 12 h de luz y 12 h de oscuridad
(Fernández y Suárez, 2009).
of distilled H
2
O, plus chloramphenicol,
tetracycline and streptomycin (50
mg.L
-1
) in Erlenmeyer asks and
pH adjusted to 6]. The medium
was sterilized and left to cool to a
temperature of 36 °C and poured into
80 mm diameter Petri dishes. Once
solidied, the cooling dual culture
(DC) was established according to the
methodology described by Bell et al.
(1982).
The A-53, A-34 autochthonous
strains of Trichoderma harzianum
and the TS-3 of T. viride were
provided by the Provincial Laboratory
of Plant Health (LAPROSAV-
Granma), these were isolated from
agroecological horticultural crops
in the eastern region of Cuba and
the native isolates of Fusarium spp.
(Table 1) were obtained from tobacco
cultivation (stem sections) in areas
of commercial production of this
plant, these remained preserved
in the collection of phytopathogens
of the Laboratory of Agricultural
Microbiology, University of Granma.
In the Petri dishes with PDA,
a disc of ve mm of diameter with
active mycelium of Fusarium spp.
colonies was deposited at one end
(Table 1) and at the other end a dish
with Trichoderma harzianum and T.
viride strains was placed; both had
72 h of growth. Then the dishes were
sealed with paralm and incubated
at 28±2 °C, with intervals of 12 h of
light and 12 h of darkness (Fernandez
and Suarez, 2009).
The inhibition percentage of
radial growth (PICR) was evaluated
at 24, 72 and 168 h, using the
formula PICR= [(R1-R2)/R1] x100,
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Cuadro 1. Procedencia de los aislados de Fusarium oxysporum y
Fusarium phyllophillum obtenidos de tallos en cultivo de
tabaco (Nicotiana tabacum) en la provincia Granma, Cuba.
Table 1. Origin of the isolates of Fusarium oxysporum and Fusarium
phyllophillum obtained from stems in tobacco cultivation
(Nicotiana tabacum) in Granma province, Cuba.
Cepa Localidad/Municipio Cultivar Coordenadas Especies
A Bueycito/Buey Arriba SS-96
20°14’20.5”N
76°46’28.8”W
F. oxysporum
B Bueycito/Buey Arriba SS-96
20°14’11.4”N
76°46’27.4”W
F. oxysporum
C Monjará/Guisa Habana-92
20°17’51.9”N
76°36’08.7”W
F. oxysporum
D Monjará/Guisa Corojo-2006
20°18’07.3”N
76°36’42.6”W
F. oxysporum
E El Dorado/Bayamo SS-96
20°15’52.3”N
76°44’43.8”W
F. phyllophillum
F El Dorado/Bayamo Habana-92
20°15’55.7”N
76°44’35.8”W
F. phyllophillum
G Corojito/Buey Arriba Habana-92
20°11’05.2”N
76°43’21.7”W
F. phyllophillum
H Santa Rita/Jiguaní Habana-92
20°20’11.9”N
76°29’24.1”W
F. oxysporum
I Los Cayos/Yara Habana-2000
20°18’20.2”N
76°50’00.6”W
F. phyllophillum
Se evaluó el porcentaje de
inhibición del crecimiento radial
(PICR) a las 24, 72 y 168 h,
empleándose para ello la fórmula
PICR= [(R1-R2)/R1] x100, donde
R1 es el crecimiento radial
del patógeno (testigo) y R2 el
crecimiento radial del patógeno
en CD (Esquivel et al., 2019). Se
consideró como el efecto antibiosis
el PICR a las 24 h, momento en el
cual los hongos no interactuaban
físicamente. Al séptimo día se
registró el antagonismo sobre el
topatógeno, según la escala de
capacidad antagónica de Bell et al.
(1982), donde Clase 1: Trichoderma
crece completamente sobre el medio
where R1 is the radial growth of
the pathogen (control) and R2 the
radial growth of the pathogen in CD
(Esquivel et al., 2019). The antibiosis
effect was considered as the PICR
at 24 h, at which time the fungi
were not physically interacting. On
the seventh day, antagonism on
the phytopathogen was recorded,
according to the antagonistic
capacity scale of Bell et al. (1982),
where Class 1: Trichoderma
grows completely on the culture
medium and the pathogen. Class
2: Trichoderma reaches 2/3 of the
surface of the culture medium. Class
3: Trichoderma and the pathogen
colonize half of the surface of the
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de cultivo y el patógeno. Clase
2: Trichoderma alcanza 2/3 de la
supercie del medio de cultivo.
Clase 3: Trichoderma y el patógeno
colonizan la mitad de la supercie
del medio y ninguno de ellos domina
sobre el otro. Clase 4: El organismo
patógeno coloniza al menos 2/3 de
la supercie del medio. Clase 5:
El patógeno crece por encima del
aislado de Trichoderma y ocupa
casi toda la supercie del medio.
La actividad micoparasítica se
determinó a partir del momento
de la interacción física entre los
hongos (antagonista vs. patógeno)
en CD, entre las 72-96 h. para ello,
se tomaron tres muestras por cada
tratamiento del sitio de contacto y
se observaron al microscopio óptico
marca Novel, modelo N 200 M con
cámara digital acoplada HDCE-X3,
de este modo se evidenció el tipo
de interacción hifal (penetración,
enrollamiento, vacuolización,
deformación y granulación).
Se utilizó un diseño
completamente al azar con 27
tratamientos conformados a partir
de la combinación de las tres cepas
de Trichoderma, A-53 y A-34 (T.
harzianum) y TS-3 (T. viridae) y
nueve aislados de Fusarium (A,
B, C, D, E, F, G, H, I), con cuatro
réplicas por cada tratamiento,
así como, los correspondientes
controles del antagonista y
topatógeno sin interactuar entre
sí. Para el procesamiento estadístico
se utilizó un análisis de varianza
(ANOVA) bifactorial y la prueba
de comparación múltiple de medias
de Tukey (p≤0,05), procesado con
medium and none of them dominates
over the other. Class 4: The pathogen
colonizes at least 2/3 of the surface of
the medium. Class 5: The pathogen
grows above the Trichoderma isolate
and occupies almost all the surface of
the medium.
The mycoparasitic activity was
determined from the moment of
physic interaction between fungi
(antagonist vs pathogen) in CD,
between 72-96 h. for that, three
samples were taken for each
treatment from the contact site and
were observed under a Novel optical
microscope, model N 200 M with
HDCE-X3 coupled digital camera,
in this sense the type of hyphal
interaction (penetration, winding,
vacuolization, deformation and
granulation) was evidenced.
A completely randomized design
was used with 27 treatments
conformed from the combination of
three strains of Trichoderma, A-53
and A-34 (T. harzianum) and TS-3
(T. viridae) and nine isolates of
Fusarium (A, B, C, D, E, F, G, H, I),
with four replicas by each treatment,
as well as, the corresponding controls
of the antagonist and phytopathogen
without interacting with each
other. For the statistical processing
a bifactorial analysis of variance
(ANOVA) and the Tukey’s multiple
comparison means test (p≤0.05) were
used, processed with the STATISTIC
2008 (StatSoft, 2007) statistical
package. Prior to ANOVA the
data expressed in percentage were
transformed by 2*[RAÍZ(X/100)], due
to the same did not complied with the
normality test.
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el paquete estadístico STATISTIC
2008 (StatSoft, 2007). Previo al
ANOVA los datos expresados en
porcentaje fueron transformados
por 2*[RAÍZ(X/100)], debido a que
los mismos no cumplieron con la
prueba de normalidad.
Resultados y discusión
Al analizar la interacción
entre las cepas se evidenciaron
diferencias signicativas entre
tratamientos (p≤ 0,05) para la
variable PICR a las 24, 72 y 168
h de confrontación. A las 24 h, el
rango de inhibición osciló entre
0,00 y 65,08 %, luego a las 72 h se
registraron valores entre 1,25 y
136,79 % y nalmente a las 168 h se
observó una inhibición intermedia
de 40,96 a 57,22 %; donde el 59,25 %
de las interacciones antagonista vs.
topatógeno registraron un PICR
superior a 50 %. Momento en el
cual, las cepas de Trichoderma spp.,
estabilizaron su efecto de biocontrol
sobre el hongo (cuadro 2). Lo
expuesto, se atribuye a una menor
variabilidad del efecto de biocontrol
del antagonista, así como, a una
cantidad mayor de interacciones
con valores intermedios de PICR,
posibilitando de este modo, un
mayor crecimiento sobre las placas
Petri de T. harzianum y T. viride
en comparación con el topatógeno.
Lo cual se relaciona con lo
observado por Hoyos et al. (2019),
donde Trichoderma spp. logró el
mayor crecimiento in vitro sobre
F. oxysporum aislado de Capsicum
annuum L.
Results and discussion
When analyzing the interaction
between the strains, signicant
differences between treatments
(p≤ 0.05) were observed for the
variable PICR at 24, 72 and 168 h
of confrontation. At 24 h, the range
of inhibition oscillated between 0.00
and 65.08 %, then at 72 h values
between 1.25 and 136.79 % were
recorded and nally at 168 h an
intermediate inhibition of 40.96 to
57.22 % was observed; where 59.25 %
of the antagonist vs. phytopathogen
interactions registered a PICR higher
than 50 %. Moment in which, the
strains of Trichoderma spp. stabilized
their effect of biocontrol on the fungus
(table 2). The above is attributed to
a lower variability of the biocontrol
effect of the antagonist, as well as, to
a greater quantity of interactions with
intermediate values of PICR, making
possible in this way, a greater growth
on the Petri dishes of T. harzianum
and T. viride in comparison with
the phytopathogen. Which is related
to what was observed by Hoyos et
al. (2019), where Trichoderma spp.
achieved the greatest in vitro growth
on F. oxysporum isolated from
Capsicum annuum L.
Suárez et al. (2008) demonstrated
that the antagonism of T. harzianum
against F. solani, associated with
the wilt of Passiora edulis Sims,
at 240 h of confrontation in CD
presented inhibition greater than
50 %. This result surpassed some
of the treatments evaluated in the
present investigation, which could be
due to differences in the origin of the
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Cuadro 2. Porcentaje de inhibición del crecimiento radial (PICR) de los
aislados de Fusarium oxysporum y Fusarium phyllophillum
evaluados en cultivos duales con las cepas A-34, A-53 y TS-3 de
Trichoderma spp.
Table 2. Percentage of radial growth inhibition (PICR) of Fusarium
oxysporum and Fusarium phyllophillum isolates evaluated in
dual cultures with Trichoderma spp strains A-34, A-53 and TS-3.
Trichoderma spp. Fusarium spp. PICR 24h (%) PICR 72h (%) PICR 168h (%)
A-53
A
40,00 bcde 42,63 defgh 53,89 abc
A-34 40,00 bcde 15,03 abcde 52,50 abc
TS-3 44,44 bcde 15,05 abcdef 50,00 abc
A-53
B
14,58 abcde 34,04 bcdefg 49,44 abc
A-34 18,75 abcde 29,42 cdefgh 57,22 c
TS-3 12,50 abcde 10,84 abcde 49,72 abc
A-53
C
57,14 de 55,62 fghi 53,89 abc
A-34 65,08 e 70,77 ghij 54,44 abc
TS-3 57,14 de 44,56 fghi 56,39 c
A-53
D
0,00 a 18,52 abcdef 46,94 abc
A-34 9,09 abcd 15,56 abcdef 52,50 abc
TS-3 3,03 ab 18,52 abcdef 49,17 abc
A-53
H
35,90 bcde 22,77 abcdefg 40,96 a
A-34 35,90 bcde 2,74 ab 52,71 abc
TS-3 35,90 bcde 2,82 abc 40,96 a
A-53
E
41,18 cde 57,12 fghi 45,56 abc
A-34 37,25 bdce 85,88 ij 55,28 bc
TS-3 31,37 bcde 105,77 j 56,39 c
A-53
F
0,00 a 16,50 abcdef 43,89 abc
A-34 60,00 de 30,04 defgh 54,17 abc
TS-3 0,00 a 18,18 abcdef 50,56 abc
A-53
G
0,00 a 1,25 a 43,06 abc
A-34 5,56 abc 15,24 abcde 55,00 abc
TS-3 8,33 abc 6,42 abcde 48,89 abc
A-53
I
35,90 bcde 10,52 efgh 43,89 abc
A-34 25,54 abcde 38,13 defgh 55,28 bc
TS-3 61,54 de 136,79 j 54,44 abc
EE
y
- 0,12 0,22 0,17
Trichoderma spp.: T. harzianum (A-53 y A-34) y T. viride (TS 3). Fusarium spp.: F. oxysporum (A, B, C, D,
H) y F. phyllophillum (E, F, G, I).
y
: error estándar. Letras diferentes en las columnas señalan diferencias
signicativas (Tukey, p≤0,05).
Trichoderma spp.: T. harzianum (A-53 and A-34) and T. viride (TS 3). Fusarium spp.: F. oxysporum (A, B, C,
D, H) and F. phyllophillum (E, F, G, I).
y
: standard error. Different letters in the columns indicate signicant
differences (Tukey, p≤0.05).
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Suárez et al. (2008) demostraron
que el antagonismo de T. harzianum
frente F. solani, asociado a la
marchitez de Passiora edulis Sims,
a las 240 h de enfrentados en CD
presentó inhibición mayor al 50 %.
Dicho resultado superó algunos de
los tratamientos evaluados en la
presente investigación, lo que pudo
estar dado por diferencias en cuanto
a la procedencia de las cepas del
antagonista, a la virulencia de estas,
así como, por la poca cantidad de cepas
evaluadas y el tiempo de duración del
ensayo, entre otras.
Por otra parte, García (2016)
al realizar una evaluación del
antagonismo de cepas de T.
harzianum y T. viride, frente a
F. oxysporum y Colletotrichum
coccodes (Wallr.) S. Hughes,
aislados de Aloe vera (L.) Burm y
Vaccinium corymbosum L., observó
un porcentaje de inhibición del
crecimiento de Fusarium spp., de 72
% y 59 % en C. coccodes, superando lo
alcanzado en este estudio. Mientras
que, Vargas et al. (2012) evidenciaron
que especies de Trichoderma pueden
alcanzar PICR superior al 80%
frente a aislados de Rhizoctonia sp.
y Colletotrichum sp., evidenciándose
un alto nivel de topatogenicidad del
antagonista sobre las dos especies
fúngicas analizadas. Recientemente
Pérez et al. (2017) informaron que, T.
harzianum cepa A-34 evaluada en este
ensayo, alcanzó a las 120 h un 100 %
de inhibición del crecimiento micelial
del tizón del arroz (Pyricularia grisea
Sacc), lo cual se consideró como una
acción hiperparásita de esta cepa
sobre el topatógeno.
antagonist strains, their virulence, as
well as the small number of strains
evaluated and the duration of the
trial, among others.
On the other hand, García (2016)
when carrying out an evaluation of the
antagonism of T. harzianum strains
and T. viride, against F. oxysporum
and Colletotrichum coccodes (Wallr.)
S. Hughes, isolates of Aloe vera (L.)
Burm and Vaccinium corymbosum
L., a growth inhibition percentage of
Fusarium spp., of 72 % and 59 % was
observed in C. coccodes, exceeding
what was achieved in this study. While,
Vargas et al. (2012) evidenced that
the species of Trichoderma can reach
a PICR higher than 80% compared
to the isolates of Rhizoctonia sp. and
Colletotrichum sp., evidencing a high
level of phytopathogenicity of the
antagonist on the two fungal species
tested.
Recently Pérez et al. (2017)
reported that the strain A-34 of T.
harzianum evaluated in this assay,
reached at 120 h 100% mycelial growth
inhibition of rice blight (Pyricularia
grisea Sacc), which was considered as
a hyperparasitic action of this strain
on the phytopathogen.
This variability of results, in relation
to the antibiosis effect of different
evaluated strains of Trichoderma in
previous researches such as those
carried out by Mendoza et al. (2015),
Hernández et al. (2016) and Ronnie-
Gakegne et al. (2018), highlights that
the PICR is a variable indicator and
it can depend on different factors,
such as, the phytopathogenic specie
and the crop where it was isolated,
the antagonist and its virulence, the
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Esta variabilidad de resultados,
con relación al efecto de antibiosis
de diferentes cepas de Trichoderma
evaluadas en investigaciones
anteriores como las realizadas por
Mendoza et al. (2015), Hernández
et al. (2016) y Ronnie-Gakegne et al.
(2018), pone de maniesto que el PICR
es un indicador variable y el mismo
puede depender de diferentes factores,
entre los que destacan, la especie
topatógena y el cultivo donde fue
aislada, el antagonista y su virulencia,
el proceso de incubación y la duración
del ensayo. Así mismo, es importante
destacar que no se encontraron
trabajos publicados que abordaran
el antagonismo de Trichoderma spp.,
sobre Fusarium spp., procedente de N.
tabacum, lo que sustenta la novedad
de estos resultados.
Al analizar el efecto de antibiosis
(PICR 24 h) se observó variabilidad
en las interacciones antagonista vs.
topatógeno. Los valores de este
indicador oscilaron en un rango de 0-65
%. Un 70,37 % de las interacciones
registraron valores de antibiosis por
encima del 10 %, a excepción de A-53 x
G, D y F, A-34 x G y D y TS-3 x F, G y
D (gura 1).
El resultado expuesto posee
similitud con lo informado por Cruz-
Triana et al. (2017), dichos autores
registraron variabilidad entre 5-80 % de
la antibiosis por efecto del antagonista
T. asperellum Samuels sobre patógenos
fúngicos que afectan a Glycine max (L.).
Por su parte Sánchez et al. (2017) dieron
a conocer que el efecto antibiosis es la
síntesis de sustancias con actividad
antifúngica, previo al contacto físico
entre los hongos.
incubation process and the duration of
the trial. Likewise, it is important to
emphasize that there were not found
published works that approached the
antagonism of Trichoderma spp. on
Fusarium spp. from N. tabacum, which
sustains the novelty of these results.
When analyzing the antibiosis effect
(PICR 24 h) variability in this antagonist
interaction vs phytopathogen was
observed. The values of this indicator
oscillated in a range of 0-65 %. A 70.37
% of the interactions registered values
of antibiosis above 10 %, with the
exception of A-53 x G, D and F, A-34 x
G and D and TS-3 x F, G and D (gure
1).
The exposed result is similar to that
reported by Cruz-Triana et al. (2017),
these authors recorded variability
between 5-80 % of antibiosis due to the
effect of the antagonist T. asperellum
Samuels on the fungal pathogens that
affect to Glycine max (L.). For their
part Sánchez et al. (2017) reported that
the antibiosis effect is the synthesis of
substances with antifungal activity,
prior to the physical contact between
the fungi.
Under the experimental conditions
evaluated, in the rst 24 h the isolates
of F, G and D of the phytopathogen
were the least inhibited by A-53 (T.
harzianum) and TS-3 (T. viride),
which noted that the said strains did
not achieve an effective antibiosis at
this moment. Showing that, in the
rst hours of interaction, the fungus
can defend itself from the effect of
antifungal substances synthetized by
the antagonist, or these substances
are produced in insufcient quantities
for the inhibition (León et al. 2017).
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Bajo las condiciones experimentales
evaluadas, en las primeras 24 h los aislados
F, G y D del topatógeno fueron los menos
inhibidos por A-53 (T. harzianum) y TS-3
(T. viride), lo cual señaló que dichas cepas
no lograron una antibiosis efectiva en este
momento. Poniéndose de maniesto que,
en las primeras horas de interacción el
hongo puede defenderse del efecto de las
sustancias antifúngicas sintetizadas por
el antagonista, o que dichas sustancias
son producidas en cantidades insucientes
para la inhibición (León et al., 2017).
Al analizar la interacción entre
cepas de Trichoderma spp., y aislados de
Fusarium spp., se registraron diferencias
signicativas entre tratamientos según
la prueba de comparación múltiple de
medias de Tukey (p≤ 0,05) para la variable
antagonismo. A las 168 h un 77,77 % de las
Figura 1. Antibiosis (PIRC 24h) ejercida por las cepas A-34, A-53 y TS-3
de Trichoderma spp., sobre aislados de Fusarium oxysporum y
Fusarium phyllophillum en cultivos duales. Las barras sobre
la línea muestran el error estándar.
Figure 1. Antibiosis (PIRC 24h) exerted by the strains A-34, A-53 and
TS-3 of Trichoderma spp., on isolates of Fusarium oxysporum
and Fusarium phyllophillum in dual crops. The bars above the
line show the standard error.
When analyzing the interaction
between the strains of Trichoderma
spp., and the isolates of Fusarium spp.,
signicant differences were recorded
between the treatments according
to the Tukey’s multiple comparison
means test (p≤ 0.05) for the variable
antagonism. At 168 h 77.77% of
the interactions corresponded to
the class 2 of the scale and none
isolate was placed in the class 4 or
5, considered of low antagonistic
capacity, according to the described
by Bell et al. (1982). This evidenced an
intermediate antagonistic effect of the
autochthonous strains of Trichoderma
spp., on the Fusarium spp isolates
evaluated (Table 3). The result
suggests that the three strains of the
antagonist can be evaluated in eld to
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interacciones correspondieron a la clase
2 de la escala y ningún aislado se ubicó
en la clase 4 o 5, consideradas de baja
capacidad antagónica, según lo descrito
por Bell et al. (1982). Lo cual evidenció un
efecto antagonista intermedio de las cepas
autóctonas de Trichoderma spp., sobre
los aislados de Fusarium spp. evaluados
(cuadro 3). El resultado sugiere que las tres
cepas del antagonista pueden ser evaluadas
en campo para determinar su potencial de
biocontrol sobre especies F. oxysporum y F.
phyllophillum. Además, como tendencia
se observaron los valores menos deseados
de antagonismo en A-53 (T. harzianum) x
D (F. oxysporum), TS-3 (T. viride) x H (F.
oxysporum), A-53 (T. harzianum) x G (F.
phyllophillum), TS-3 (T. viride) x G (F.
phyllophillum) y A-53 (T. harzianum) x I
(F. phyllophillum), representando un 18,51
% del total de las interacciones.
Pérez et al. (2017), al evaluar el efecto
de T. harzianum (cepa A-34) sobre P.
grisea en CD logró una ubicación de clase
1 en la escala de capacidad antagónica,
dicha cepa logró expresar su máximo
potencial competitivo sobre el hongo. En
un estudio anterior Reyes (2012) demostró
que a las 48 h un 86,44 % de los aislados
de T. harsianum y T. asperellum frente a
Rhizoctonia solani, se ubicaron en la clase
2 de la escala y posteriormente a las 96 h
se registró un incremento de un 93,22 %.
Los resultados de esta investigación son
ligeramente inferiores a los expuestos
anteriormente, debido a que los mismos
se realizaron bajo diferentes condiciones
experimentales y de duración del ensayo, así
como, se utilizaron especies antagonistas
y topatógenas distintas. No obstante,
se demostró el potencial competitivo y
antagónico que caracteriza a Trichoderma
spp., como agente de biocontrol.
determine their potential of biocontrol
on the species of F. oxysporum and F.
phyllophillum. Also, as a tendency the
least desired values of the antagonism
were observed in A-53 (T. harzianum)
x D (F. oxysporum), TS-3 (T. viride) x
H (F. oxysporum), A-53 (T. harzianum)
x G (F. phyllophillum), TS-3 (T. viride)
x G (F. phyllophillum) and A-53 (T.
harzianum) x I (F. phyllophillum),
representing 18.51% of the total
interactions.
Pérez et al. (2017), when evaluating
the effect of T. harzianum
(Strain A-34)
on P. grisea in CD achieved a location
of class 1 on the scale of antagonistic
capacity, the said strain achieved to
express its maximum competitive
potential on the fungus. In a previous
study Reyes (2012) showed that at 48 h
86.44% of the isolates of T. harsianum
and T. asperellum against Rhizoctonia
solani, were located in the class 2 of
the scale and later at 96 h an increase
of 93.22% was recorded. The results of
this research are slightly inferior to
those previously presented, due to the
same were carried out under different
experimental conditions and duration
of the assay, as well as, different
antagonist and phytopathogen species
were used. However, the competitive
and antagonistic potential that
characterizes Trichoderma spp. as a
biocontrol agent was demonstrated.
From the scientic point of view,
it was possible to demonstrate
the mycoparasitic activity of T.
harzianum (strains A-34 and A-53)
and T. viride (strain TS-3) on all the
isolates of Fusarium spp., between 72
and 96 h of confrontation in CD. Five
main forms of mycoparasitism were
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Cuadro 3. Capacidad antagónica según la escala de Bell (1-5) ejercida
por las cepas A-34, A-53 y TS-3 de Trichoderma spp., sobre los
aislados de F. oxysporum y F. phyllophillum en cultivos duales.
Table 3. Antagonistic capacity according to the Bell scale (1-5) exercised
by Trichoderma A-34, A-53 and TS-3 strains on F. oxysporum
and F. phyllophillum isolations in dual crops.
Trichoderma spp. Fusarium spp. Clase
A-53
A
2,00 a
A-34 2,00 a
TS-3 2,00 a
A-53
B
2,25 ab
A-34 2,00 a
TS-3 2,25 ab
A-53
C
2,00 a
A-34 2,00 a
TS-3 2,00 a
A-53
D
4,00 c
A-34 2,00 a
TS-3 2,00 a
A-53
H
2,25 ab
A-34 2,00 a
TS-3 3,25 bc
A-53
E
2,50 ab
A-34 2,00 a
TS-3 2,00 a
A-53
F
2,50 ab
A-34 2,00 a
TS-3 2,00 a
A-53
G
3,75 c
A-34 2,00 a
TS-3 3,00 abc
A-53
I
3,00 abc
A-34 2,00 a
TS-3 2,00 a
EE
y
- 0,10
Trichoderma spp.: T. harzianum (A-53 y A-34) y T. viride (TS 3). Fusarium spp.: F. oxysporum (A, B, C, D, H) y F.
phyllophillum (E, F, G, I).
y
: error estándar. Letras diferentes en las columnas señalan diferencias signicativas (Tukey,
p≤0,05).
Trichoderma spp.: T. harzianum (A-53 and A-34) and T. viride (TS 3). Fusarium spp.: F. oxysporum (A, B, C, D, H) and F.
phyllophillum (E, F, G, I).
y
: standard error. Different letters in the columns indicate signicant differences (Tukey, p≤0.05).
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Desde el punto de vista cientíco
se logró evidenciar la actividad
micoparasítica de T. harzianum (cepas
A-34 y A-53) y T. viride (cepa TS-3) sobre la
totalidad de los aislados de Fusarium spp.
entre las 72 y 96 h de confrontación en CD.
Se constataron cinco formas principales de
micoparasitismo, entre ellas, penetración
(T. harzianum), enrollamiento (T.
harzianum), vacuolización, deformación y
granulación del contenido citoplasmático
(T. viride) (gura 2).
Figura 2. Actividad micoparasítica ejercida por las cepas A-34, A-53 y TS-3 de
Trichoderma spp., sobre aislados de F. oxysporum y F. phyllophillum
en cultivos duales. Vacuolización citoplasmática de macroconidios y
deformación (A) y granulación citoplasmática de hifas (B) cepa TS-3
(T. viride). Hifas del antagonista en el interior de hifas del fitopatógeno
(C) cepa A-34 (T. harzianum). Hifa del antagonista enrollando a una
hifa del fitopatógeno (D) cepa A-53 (T. harzianum). 40X.
Figure 2. Mycoparasitic activity exercised by the A-34, A-53 and TS-3 strains of
Trichoderma spp., on isolates of F. oxysporum and F. phyllophillum
in dual crops. Cytoplasmic vacuolization of macroconidia and
deformation (A) and cytoplasmic granulation of hypfas (B) strain
TS-3 (T. viride). Antagonist hypfas inside phytopathogenic hypfas
(C) strain A-34 (T. harzianum). Antagonist hypfa by winding a
phytopathogenic hypfa (D) strain A-53 (T. harzianum). 40X.
observed, including penetration (T.
harzianum), winding (T. harzianum),
vacuolization, deformation and
granulation of cytoplasmic contents
(T. viride) (Figure 2).
According to Retana et al. (2018),
when the direct interaction between
the hyphas of the fungi (>24 h) is
established, other mechanisms
of action such as competition,
mycoparasitism and hyperparasitism
are manifested, which interrelated
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De acuerdo a Retana et al. (2018),
cuando se establece la interacción
directa entre las hifas de los hongos (>24
h), se maniestan otros mecanismos
de acción como competencia,
micoparasitismo e hiperparasitismo,
que interrelacionados con la síntesis
de enzimas líticas proteinasas y
quitinasas, así como, la secreción
de metabolitos secundarios como
trichodermina, gliovirina y gliotoxina,
posibilitan de forma efectiva el proceso
de biocontrol.
La vacuolización citoplasmática
de los macroconidios de Fusarium
spp., observada en esta investigación
es raramente documentada en la
literatura cientíca especializada
que aborda esta temática y se
relaciona con una afectación
directa sobre la viabilidad de estas
esporas. Probablemente, la acción
enzimática del antagonista posibilitó
la penetración, deformación,
desintegración y muerte de las
estructuras fúngicas del topatógeno.
Al respecto, se estableció que estas
formas de micoparasitismo coinciden
con las señaladas por García (2016)
para el género Fusarium spp. aislado
de sábila y arándano. Según Rivera
et al. (2016) en su estudio sobre el
antagonismo de Trichoderma spp.,
frente al topatógeno Stromatinia
cepivora (Berk.) Whetzel en el cultivo
de cebolla, la actividad micoparasítica
estuvo caracterizada por la
vacuolización y la penetración.
Los resultados expuestos en esta
investigación poseen relación con lo
evidenciado por Hoyos et al. (2019),
los cuales informaron alteraciones
citoplasmáticas con presencia de
with the synthesis of lytic proteinase
and chitinase enzymes, as well as the
secretion of secondary metabolites
such as trichodermin, gliovirin and
gliotoxin, effectively enable the
biocontrol process.
The cytoplasmic vacuolization
of the macroconidia of Fusarium
spp. observed in this research is
rarely documented in the specialized
scientic literature that addresses this
issue and is related to a direct effect on
the viability of these spores. Probably,
the enzymatic action of the antagonist
made possible the penetration,
deformation, disintegration and
death of the fungal structures of
the phytopathogen. In this regard,
it was established that these forms
of mycoparasitism coincide with
those reported by Garcia (2016) for
the genus Fusarium spp. isolated
from aloe and blueberry. According
to Rivera et al. (2016) in their study
on the antagonism of Trichoderma
spp. against the phytopathogen
Stromatinia cepivora (Berk.) Whetzel
in onion crops, mycoparasitic activity
was characterized by vacuolization
and penetration.
The results presented in this
research have relation with that
evidenced by Hoyos et al. (2019),
which informed about cytoplasmatic
alterations with presence of vacuoles
and granulations, as well as winding
of hyphas of Trichoderma spp. on
Fusarium species that cause chili
wilt in Mexico. Therefore, it was
demonstrated in the study the effect
of growth inhibition, antibiosis,
antagonism and mycoparasitism of the
autochthonous strains of Trichoderma
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vacuolas y granulaciones, así como
enrollamiento de hifas de Trichoderma
spp., sobre especies de Fusarium
causantes de la marchites del chile en
México. Por tanto, quedó demostrado
en el estudio el efecto de inhibición del
crecimiento, antibiosis, antagonismo
y micoparasitismo de las cepas
autóctonas de Trichoderma spp., A-34,
A-53 y TS-3 sobre aislados nativos de
Fusarium spp., procedentes de N.
tabacum en la provincia Granma,
Cuba.
A partir de un análisis integral
de los resultados, se consideró que
las cepas A-34 y TS-3 lograron las
mejores tendencias de biocontrol;
basado en los indicadores PICR,
antibiosis y capacidad antagónica. Por
tanto, se recomienda probar su uso en
campo para el manejo de F. oxysporum
y F. phyllophillum en N. tabacum,
mientras que, la cepa A-53 puede
aplicarse de forma combinada con
A-34 y TS-3 para potenciar su efecto.
Lo anterior, señala la importancia
práctica de estos resultados en la
selección de cepas autóctonas de
Trichoderma spp., para el desarrollo
de un biofungicida de interés agrícola
local.
Conclusiones
Se determina la actividad
antagónica in vitro de cepas
autóctonas de T. harzianum y T.
viride sobre aislados de Fusarium
spp., procedentes de N. tabacum. A
los siete días de establecido el CD las
cepas de Trichoderma spp., registran
valores intermedios de inhibición del
topatógeno, la competitividad del
spp., A-34, A-53 and TS-3 on native
isolates of Fusarium spp. from N.
tabacum in Granma province, Cuba.
From an integral analysis of the
results, it was considered that the
strains A-34 and TS-3 achieved the
best biocontrol tendencies; based on
the PICR indicators, antibiosis and
antagonistic capacity. Therefore, it
is recommended to test their use in
the eld for the management of F.
oxysporum and F. phyllophillum in
N. tabacum, while strain A-53 can
be applied in combination with A-34
and TS-3 to enhance their effect.
The above, points out the practical
importance of these results in the
selection of autochthonous strains of
Trichoderma spp. for the development
of a biofungicide of local agricultural
interest.
Conclusions
The in vitro antagonistic activity of
autochthonous strains of T. harzianum
and T. viride on isolates of Fusarium
spp. from N. tabacum was determined.
Seven days after the establishment of
the CD, the strains of Trichoderma
spp. register intermediate values of
inhibition of the phytopathogen, the
competitiveness of the antagonist is
located mainly in class two of Bell’s
scale and it is found that penetration,
winding, vacuolization, deformation
and granulation constitute the main
forms of mycoparasitism. Which
points to this biocontrol method
as an alternative to be considered
for the management of Fusarium
spp. in tobacco agroecosystems
and the possibility of obtaining
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antagonista se ubica mayoritariamente
en la clase dos de la escala de Bell y se
constata que, penetración, enrollamiento,
vacuolización, deformación y granulación
constituyen las principales formas
de micoparasitismo. Lo cual señala
a este método de biocontrol como
una alternativa a tener en cuenta
para el manejo de Fusarium spp., en
agroecosistemas tabacaleros y no se
descarta la posibilidad de obtener nuevos
aislamientos autóctonos de Trichoderma
spp., con vistas a evaluar su efecto sobre
especies de Fusarium spp., que afectan a
N. tabacum.
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